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《安徽医科大学》 2019年
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万古霉素对异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌生物膜构成的影响

桑瑞瑞  
【摘要】:目的:万古霉素对于异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(h VISA)生物膜形成的影响尚未明确。本研究旨在探讨万古霉素对临床h VISA生物膜总量以及主要成分的影响,及其与万古霉素治疗h VISA失败率高的关系。方法:(1)从临床收集的S.aureus中,通过菌群谱型分析-曲线下面积法(PAP/AUC)鉴定h VISA菌株;(2)将临床菌株h VISA(05307)和Mu3菌株(ATCC 700698,h VISA参考菌株)暴露于不同浓度(1/4×MIC,1/2×MIC,1×MIC)的万古霉素,单独的肉汤和不含抗生素的细菌悬浮液分别作为阴性和阳性对照;(3)使用结晶紫(CV)染色测量h VISA的生物膜总量;(4)并在共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)下显现;(5)提取生物膜中的细胞外基质(ECM);(7)通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析从生物膜中提取的蛋白质组分并用Bradford蛋白质检测试剂盒对蛋白质总量进行定量;(8)ECM中的细胞外多糖粘附素(PIA)采用免疫斑点印迹法并通过灰度值分析进行半定量;(9)细胞外DNA(e DNA)采用酶敏感实验进行间接的半定量。结果:(1)与阳性对照相比,1×MIC万古霉素处理组h VISA的生物膜明显增强,但是当细菌暴露于亚抑菌浓度的万古霉素中,两株菌株中的生物膜形成都没有明显改变。(2)不同浓度的万古霉素处理,与阳性对照组相比,两株菌株形成的生物膜中,其ECM里的PIA和蛋白质组分的表达量均没有明显差异。加入DNase I处理后,1×MIC万古霉素处理的菌株形成的生物膜被显着抑制到与其他处理组相似的水平。结论:1×MIC的万古霉素诱导的e DNA释放是万古霉素增强h VISA生物膜形成的必要因素,这可能有助于解释万古霉素治疗h VISA感染失败率高的原因。
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R446.5

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