收藏本站
《安徽医科大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

结核杆菌抗原诱导活化的人γδT细胞凋亡机制探讨

梅传忠  
【摘要】:目的 (1)建立结核杆菌抗原(Mtb-Ag)再刺激活化的人γδT细胞凋亡模型;(2)观察不同浓度乙醇和二甲基亚砜(DMSO)致γδT细胞和αβT细胞凋亡及对细胞活性的影响:(3)探讨神经酰胺(C2-Cer)诱导γδT细胞和αβT细胞凋亡作用的不同之处;(4)应用信号分子阻断剂观察PI3K,MAPK和PKC等信号传导途径在Mtb-Ag再刺激诱导γδT细胞凋亡中的作用。 方法 (1)正常人外周血单个核细胞分别用Mtb-Ag和CD3单抗(CD3mAb)刺激并加IL-2培养扩增,分别获得Mtb-Ag激活的T细胞(MtbAT)(γδT细胞为主)和CD3mAb激活的T细胞(CD3AT)(αβT细胞为主)。(2)培养15d~25d的MtbAT用3种浓度Mtb-Ag分别再刺激24h后,应用Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术(FCM)检测γδT细胞凋亡。(3)MtbAT用Mtb-Ag(10.0μg/ml)分别再刺激3h、6h、12h、24h后,检测γδT细胞凋亡情况。(4)用4种浓度乙醇和DMSO分别作用于MtbAT和CD3AT 4h、24h后,应用Annexin-V-FITC/PI染色FCM检测γδT细胞和αβT细胞凋亡,应用MTT比色法分析两类T细胞活性。(5)用4种浓度C2-Cer分别作用于MtbAT和CD3AT 3h后,检测γδT细胞和αβT细胞凋亡及细胞活性。(6)MtbAT预先用LY294002(P13K途径抑制剂)、SB203580(p38途径抑制剂)、Rottlerin(PKC抑制剂)分别处理60min,然后用Mtb-Ag(10.0μg/ml)再刺激3h后,检测γδT细胞凋亡。 结果 (1)MtbAT中γδT细胞比例可达70%~90%,CD3AT中αβT细胞比例>90%。(2)与对照组相比,5.0μg/ml MtbAg诱导γδT细胞凋亡不显著(P>0.05),凋亡 安徽医科大学硕士学位论文 细胞比例仅增加8.05%;10.0协留ml和20.0协岁ml MtbAg均显著诱一导协T细胞凋亡 (Po.ol),凋亡细胞比例分别增加35.63%及38.83%,且此二种浓度MtbAg在诱 导协T细胞凋亡方面无显著性差异(P0.05)。‘3)与对照组相比,’10.0林留ml Mth一Ag再刺激MthAT3h、6h、12h、24h均可显著诱导协T细胞凋亡(P0 .01), 凋亡细胞比例在44.21%一51 .76%之间;10.0卜留ml Mtb一Ag再刺激MthAT3h实验组 与再刺激MtbAT 24h实验组相比,在诱导协T细胞凋亡方面无显著性差异 (P0.05),后者的凋亡细胞比例仅比前者增加7.55%。(4)与对照组相比,除 浓度为1.0%及2.0%DMSO作用于apT细胞24h诱导其凋亡显著(P0.05)及浓 度为2.0%DMSO作用于apT细胞4h对细胞活性抑制显著(P0 .05)外,低浓度 乙醇及DMsO(三2.0%)诱导协T细胞和。pT细胞凋亡及抑制其细胞活性作用均 不显著(P0.05);与对照组相比,除5.0%乙醇作用于apT细胞4h及5.0%DMSO 作用于协T细胞4h诱导细胞凋亡不显著(P0.05)外,高浓度乙醇和DMSO(5 .0%) 诱导协T细胞和apT细胞凋亡及抑制二者细胞活性作用均显著增加(P0 .05)。 (5)与对照组比较,低浓度CZ一cer(毛10 0 mol/L)诱导协T细胞和apT细胞凋 亡及抑制其细胞活性作用均不显著(P0.05);高浓度cZ一Cer诱导泌T细胞和apT 细胞凋亡及抑制其细胞活性作用均存在显著差异(P0.05),100协mol/L的CZ一Cer 诱导协T细胞、仪pT细胞凋亡比例分别增加104%、P。.必;及73.5%(P0.01), 活细胞区(Rl区)的细胞比例分别为对照组的88.1%(P.05)和7.8%(P0.01); 而500 p mol几时诱导协T细胞和a日T细胞凋亡比例分别增加71.9%和73.8% (P0 .01),Rl区的细胞比例分别为对照组的36.5%和2.7%(P0 .01)。 (6)Mtb一Ag再刺激Mtb灯诱导丫6T细胞凋亡可分别被sBZo35so(50.0林mol/L) 和Rortlerin(40.0林mof几)几乎完全抑制,凋亡抑制率分别为916%及98.6%;而 LY294002(10.0林mol/L)可部分抑制Mth一Ag再刺激诱导的协T细胞凋亡,凋亡抑 制率为43.1%。 结论(l)通过用较高浓度Mth一Ag(10.0林留ml)再刺激活化的Y6T细胞3h后, 可建立Mth一Ag再刺激活化的人Y6T细胞凋亡模型。(2)高浓度乙醇和DMsO (5 .0%)对协T细胞和apT细胞均有诱导凋亡作用,且对二者活性均有抑制作用。 3 安徽医科大学硕士学位论文 (3)C2一Cer能诱导声i细胞和。pT细胞发生凋亡,诱导协T细胞发生凋亡所需 CZ一Cer浓度明显高于诱导apT细胞所需浓度。(4)信号分子阻断剂的实验证 明,MAPK途径的P38通路,PI3K途径和PKC均参与了Mtb一Ag再刺激己活化协T 细胞凋亡过程。
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R392

免费申请
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 喻卫红,蔡玉娥,孟凡娟,李艳萍,逯晓波;乳腺癌细胞对八种抗癌药物的化疗敏感性[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
2 艾军;梁索源;单保恩;何兰欣;任金荣;;食管癌患者外周血淋巴细胞替代肿瘤细胞体外药敏试验相关性研究[J];癌变.畸变.突变;2006年01期
3 朱咏梅;钟进义;张丽华;;论著海生多糖肽对辐射诱发小鼠肝细胞POD和Caspase-3异常表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2006年04期
4 徐佳;张引娟;鹿刚;单保恩;;STAT3基因RNAi诱导肝癌细胞凋亡及对STAT3信号转导相关基因表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2009年05期
5 冯涛;李青旺;李健;刘智华;;鬼针草90%醇提物对U_(14)荷瘤小鼠的抑瘤效应[J];安徽农业科学;2007年04期
6 万圣云,刘弋,张俊舜;5-Fu缓释剂对直肠癌区域性化疗局部药物浓度的影响[J];安徽医药;2003年04期
7 朱国旗;汤立建;王磊;苏婧婧;汪宁;彭代银;李庆林;;黄芩苷诱导人乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡作用的研究[J];安徽中医学院学报;2008年02期
8 赵志刚,马庆铮,许纯孝;HSP70单抗联合反义寡核苷酸诱导前列腺癌细胞凋亡的研究[J];癌症;2000年10期
9 赵欣,宋今丹;克霉唑诱导人结肠癌细胞CCL229凋亡的实验研究[J];癌症;2002年06期
10 张明生,袁宏银,熊斌,邓清,唐志佼,夏东;IGF-Ⅱ mRNA、bcl-2蛋白在结肠直肠腺癌组织中的表达及临床意义[J];癌症;2002年11期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 杨锐睿;冯峰;郭宏钰;周越;;泛素-蛋白酶体途径与运动骨骼肌细胞凋亡[A];2007全国运动生理学论文报告会论文集[C];2007年
2 刘召;刘玉琳;;脱敏调免法治疗紫癜性肾炎疗效研究[A];全国第二届中医中西医结合肾脏病临床进展学术研讨会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 庞敏;虾夷扇贝毒素(Yessotoxins, YTXs)毒性作用的初步研究[D];中国海洋大学;2010年
2 于蕾;野西瓜极性生物碱A10组分诱导SGC-7901细胞凋亡线粒体通路的研究[D];北京中医药大学;2010年
3 郭尹玲;从“湿热变证”论治急性肝损伤的动物实验研究及机制初探[D];成都中医药大学;2010年
4 孟德连;精氨酸家族对肉鸡生长和脂肪代谢及肉品质相关基因转录表达水平的影响研究[D];西北农林科技大学;2010年
5 韦燕飞;白花丹醌对人肝星状细胞作用的分子机制研究[D];广西医科大学;2011年
6 杜秋香;Intermedin心血管保护作用及其机制的研究[D];山西医科大学;2011年
7 梁菲梅;清湿化瘀合剂对衣原体感染抗精子免疫性不孕的作用及机理研究[D];广州中医药大学;2011年
8 王春玲;和厚朴酚与青蒿素协同抗鼻咽癌细胞的作用及其机制研究[D];广州中医药大学;2011年
9 孙雪莲;黄芪苷对胃粘膜损伤的保护作用研究[D];广州中医药大学;2011年
10 李姵萱;疏肝清毒汤诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡及其机制的实验研究[D];广州中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王学;五种牙体修复材料对L929细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因的研究[D];南京医科大学;2010年
2 郭延锋;CSISV人工感染SPF雏鸡和商品肉仔鸡后免疫器官的细胞凋亡[D];河南科技学院;2010年
3 武永存;Survivin siRNA联合吉西他滨对肺癌细胞株A549的生长抑制作用[D];承德医学院;2010年
4 陈谦谦;不同再灌注/缺血时间间隔的缺血后处理对兔睾丸缺血再灌注损伤的影响[D];福建医科大学;2011年
5 郑玲;棉花BI基因的克隆和功能分析[D];山东师范大学;2011年
6 范琳琳;不同游泳运动大鼠下丘脑室旁核内NF-κB、Bcl-2、Bax基因的表达[D];山西医科大学;2011年
7 史志勇;葡萄籽原花青素抗人胰腺癌细胞的实验研究[D];山西医科大学;2011年
8 施荣东;Maspin、Caspase-3、COX-2与宫颈癌的关系及青藤碱与顺铂对其表达的影响[D];山西医科大学;2011年
9 李娜;铝致痴呆模型中Caspase-3基因的干预研究[D];山西医科大学;2011年
10 贾少军;甲泼尼龙琥珀酸钠与胰岛素对于脑死亡供体心肌细胞凋亡作用的研究[D];昆明医学院;2011年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王文举;李鸿钧;孙茂盛;;脂筏与T细胞信号转导[J];生命科学;2007年05期
2 梅传忠,李柏青;PKC在结核杆菌抗原诱导人γδT细胞凋亡中的作用[J];现代免疫学;2005年06期
3 丁振华,刘斐球,黄美贤,郑莉,周美娟;UVB诱导NIH3T3细胞凋亡时的信号转导机制:Ⅱ.神经酰胺所致细胞内Ca~(2+)和pH的变化[J];生物物理学报;2000年02期
4 何维,巴德年;γδT细胞的生物学意义[J];上海免疫学杂志;1997年01期
5 梅传忠;李柏青;沈继龙;;p38及PI3K在结核杆菌抗原再刺激诱导人γδT细胞凋亡信号转导中的作用[J];中国免疫学杂志;2006年03期
6 孙蕾,王会信,周廷冲;鞘磷脂与细胞生长、凋亡调控[J];军事医学科学院院刊;1998年03期
7 辛宏,颜光涛,郝秀华,王录焕,李英丽;神经酰胺介导粒细胞凋亡机理初探[J];中国免疫学杂志;1999年05期
8 姚毓奇,曾益新;神经酰胺与胞内信号传递[J];癌症;1999年05期
9 李潇;;神经酰胺可能在囊性纤维化中起作用[J];中国生物化学与分子生物学报;2009年05期
10 梅传忠,沈继龙,陈勇,李柏青;神经酰胺对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用[J];蚌埠医学院学报;2004年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 丁振华;陈桂明;刘斐球;;神经酰胺在介导UVB诱发NIH 3T3细胞凋亡中的作用[A];首届粤港生物物理学术研讨会论文集[C];1999年
2 丁振华;陈桂明;郑莉;凌朝辉;黄美贤;;UVB诱导NIH 3T3细胞凋亡时信号转导机制的初步研究:Ⅰ.神经酰胺的产生及外源性神经酰胺所致NIH 3T3细胞的凋亡[A];第五届全国光生物学学术讨论会论文摘要集[C];2000年
3 王妮妍;张珊珊;陈东红;魏颖;俞一鸣;王学路;;植物中油菜素内酯受体BRI1的调节机制及信号转导[A];2007中国植物生理学会全国学术会议论文摘要汇编[C];2007年
4 苏晓瑜;吕媛婧;刘虹辰;阮铮;王学锋;陈赛娟;奚晓东;;整合素β3胞浆段末端序列在双向信号转导中的作用及其机制[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
5 张岗;董艳铃;王晓杰;黄丽丽;康振生;;小麦成株抗条锈性的分子机制研究[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
6 丁振华;刘斐球;郑莉;凌朝辉;周美娟;;UVB诱导NIH 3T3细胞凋亡时信号转导机制的初步研究:Ⅱ.外源性神经酰胺诱导NIH 3T3细胞凋亡时细胞内Ca~(2+)和pH的变化[A];第五届全国光生物学学术讨论会论文摘要集[C];2000年
7 周建伟;;JWA基因通过NFI结合位点特异性应答氧化应激所致的DNA损伤[A];中国毒理学会第四届全国学术会议论文(摘要)集[C];2005年
8 于瑜;贾晓明;;细胞连接和信号转导在低温保存皮肤方面的研究[A];第五届全国低温生物医学及器械学术大会会议论文集[C];2006年
9 高晓琴;李荣山;;大鼠肾脏缺血预处理中COX-2和iN-OS间信号转导关系的研究[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
10 谢丛华;秦琴;曹传华;周福祥;戴静;高敏;周云峰;;信号转导子与转录活化子6活化状态与细胞凋亡和放射敏感性的关系[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王小龙;C6-神经酰胺纳米胶囊可杀癌细胞[N];科技日报;2011年
2 记者 孟华 张建新;一小时检测T细胞比值[N];新华每日电讯;2003年
3 柳斌;抗癌英雄T细胞[N];大众卫生报;2002年
4 彭萍;抗癌“隐士”——T细胞[N];大众卫生报;2004年
5 李亚兰;抗癌“隐士”T细胞[N];中国医药报;2001年
6 高书明;抗癌隐士——T细胞[N];中国中医药报;2004年
7 麦迪信;“武装”T细胞杀死黑色素瘤[N];医药经济报;2002年
8 香港麦迪信医学出版有限公司提供;围捕免疫系统“叛徒”[N];医药经济报;2002年
9 ;人体卫士:T细胞和B细胞[N];人民政协报;2003年
10 ;单己糖神经酰胺与卵巢癌顺铂耐药性关系的研究[N];中国医药报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨亚男;转化生长因子-β1和神经酰胺诱导的细胞凋亡机制的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
2 王小中;诱骗寡核苷酸靶向阻断STAT5逆转白血病K562细胞恶性表型[D];重庆医科大学;2005年
3 何飞;Notch-Deltal对人牙髓干细胞增殖及分化影响的实验研究[D];第四军医大学;2004年
4 郑祥毅;PI3K/Akt信号通路在肾缺血再灌注损伤中的调控作用[D];浙江大学;2005年
5 陈旭红;大鼠脑纹状体边缘区参与学习记忆的分子机制的研究[D];第一军医大学;2005年
6 万晶宏;促凋亡蛋白(BclGs)的信号转导机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
7 郝嘉;Pyk_2在心肌间质纤维化中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2006年
8 刘联;E-钙粘素介导的细胞黏附对卵巢癌细胞表皮生长因子受体(EGFR)的激活及其信号转导[D];山东大学;2006年
9 刘金元;青蒿琥酯抗实验性肝纤维化机理的探索性研究[D];广州中医药大学;2008年
10 姚鹏;肝干细胞的生长、分化、凋亡调控及其信号转导研究[D];第三军医大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 梅传忠;结核杆菌抗原诱导活化的人γδT细胞凋亡机制探讨[D];安徽医科大学;2004年
2 高诗娟;异种HSP_(70)及异种HSP_(70)-肿瘤抗原复合物对γδT细胞的活化作用[D];大连医科大学;2003年
3 张少云;神经酰胺类物质对海洋污损生物的防除性能及其作用机理研究[D];中国海洋大学;2012年
4 邓治;伤害对巴西橡胶树胶乳中磷脂酶A_2的影响[D];华南热带农业大学;2004年
5 申严;MAPK、PKB调节γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶在慢性阻塞性肺疾病中的作用[D];南华大学;2005年
6 王晶波;黄瓜体内酚性抗病物质合成和诱导信号转导相关机制的实验研究[D];重庆大学;2005年
7 刘俊;阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其信号机制初步探讨[D];第一军医大学;2005年
8 徐娜妮;高效液相色谱串联质谱法分析工频磁场暴露对细胞内神经酰胺的影响[D];浙江大学;2011年
9 李春艳;两种红树—秋茄和木榄幼苗抗盐生理生化基础研究[D];北京林业大学;2005年
10 潘飞燕;基于甾类激素信号转导的药物筛选模型的建立[D];南京师范大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026