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同种异体骨髓间充质干细胞修复兔股骨髁松质骨缺损的实验研究

窦强兵  
【摘要】:骨缺损常发生于创伤、感染、肿瘤切除、骨折不愈合等疾病,是骨科常见难题,近年兴起的组织工程技术为其治疗提供了一种新方法。骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有多种分化潜能,可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种中胚层细胞,是骨组织工程的常用种子细胞。本实验即以同种异体兔骨髓间充质干细胞为种子细胞,纤维蛋白为载体,观察其修复兔股骨髁松质骨缺损的效果,从而反映同种异体MSCs的体内成骨能力,并初步了解机体对同种异体MSCs的免疫排斥反应情况,为将来临床使用同种异体MSCs提供实验依据。 目的 研究兔骨髓间充质干细胞的体外分离、培养方法,并观察其生长情况。研究同种异体间充质干细胞复合纤维蛋白修复兔股骨髁松质骨缺损模型的效果,以及机体对同种异体间充质干细胞的局部免疫排斥反应。 方法 取青紫蓝兔一只于粗隆下抽取骨髓3-5ml,用全骨髓贴壁法在体外培养间充质干细胞,每日在倒置显微镜下观察其生长状况和形态,计数细胞并绘制生长曲线。取传代细胞制成5.0×10~6/ml的单细胞悬液,按1∶1与纤维蛋白混合制成MSCs-纤维蛋白复合物备用。在日本大耳兔双侧股骨髁最宽大处制作0.6cm×1.0cm松质骨缺损模型,左侧缺损区为实验侧,植入同种异体MSCs-纤维蛋白复合物,右侧缺损区为对照侧,单纯植入纤维蛋白。分别于术后2、5、8周摄双膝关节侧位片,并各处死5只动物进行组织学检查,以了解骨缺损修复情况,观察移植物局部的免疫排斥反应。


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