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《安徽医科大学》 2007年
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雌性配子与人类三原核囊胚的玻璃化冷冻研究

邢琼  
【摘要】: 第一部分小鼠MII期卵母细胞玻璃化冻、融技术研究 目的比较不同冷冻方法对小鼠成熟卵母细胞的冻存率和冻后发育潜能的影响,试图建立玻璃化冷冻技术平台,为人类卵母细胞玻璃化冷冻提供理论与技术参考。 方法以我国广泛使用的昆明品系小鼠为实验材料,以玻璃化冷冻技术为基本方法冻存小鼠成熟卵母细胞。本研究分为新鲜周期对照组和玻璃化冷冻组、玻璃化冷冻组又再分为开放式拉长麦管(OPS)组、自制麦管组和冷冻叶片(cryoleaf)组,比较它们的存活率、受精率、卵裂率和囊胚形成率。 结果新鲜周期对照组和玻璃化冷冻组之间受精率差异无显著性,卵裂率亦无显著性差异(P0.05),但是囊胚形成率之间存在显著性差异(P0.05);OPS组与自制麦管组之间存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率之间均没有显著性差异(P0.05);OPS组与cryoleaf组比较存活率之间存在显著性差异(P0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率之间均没有显著性差异(P0.05);自制麦管组与cryoleaf组之间比较也是存活率之间存在显著性差异(P0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率之间没有显著性差异(P0.05)。 结论1、初步建立了小鼠卵母细胞玻璃化冷冻技术平台;2、OPS法和cryoleaf法均可以用于冷冻昆明小鼠卵母细胞,但cryoleaf法更安全可靠。 第二部分人类未成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究 目的比较分析体外培养成熟卵母细胞及不同成熟阶段卵母细胞冷冻后的受精和发育能力,研究玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的有效性,以期能够拓展配子冷冻的领域。 方法将进行单精子胞浆内注射治疗周期中剩余的GV期卵母细胞作为研究对象,根据有无颗粒细胞将实施玻璃化冷冻的GV期卵母细胞分为含颗粒细胞组和不含颗粒细胞组;另外,又将正常IVM作为对照组,将其与GV期玻璃化冷冻组及GV期卵母细胞体外培养至MⅡ期卵母细胞实施玻璃化冷冻组共三组,并对它们的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率进行比较。 结果含颗粒细胞组和不含颗粒细胞组之间的成熟率比较存在显著性差异(P0.05),而存活率、受精率、2细胞形成率、2细胞形成率之间均没有显著性差异(P0.05)。另外, IVM组与GV玻化组之间成熟率、受精率、卵裂率均存在显著性差异(P0.05),其中成熟率与卵裂率差异极显著(P0.01);IVM组与GV期卵母细胞体外培养至MⅡ期卵母细胞玻化组间成熟率、受精率、卵裂率之间都存在显著性差异(P0.05),其中,成熟率之间差异极显著(P0.01); GV玻化组与GV期卵母细胞体外培养至MⅡ期卵母细胞玻化组之间存活率、成熟率、受精率、卵裂率之间均没有显著性差异(P0.05)。 结论 1.初步建立了人未成熟卵母细胞的玻璃化冻、融技术; 2.玻璃化冷冻未成熟卵母细胞需要保留颗粒细胞; 3.构建了初步的人类未成熟卵母细胞的玻璃化冷冻联合IVM技术雏形; 第三部分人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究 目的对人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液进行研究,来探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值。 方法将从控制性超促排卵周期中获得的人类成熟卵母细胞运用cryoleaf进行玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射-胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞的受精及发育能力。根据冷冻方法分组可以分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,分组后对它们的存活率、受精率、卵裂率以及囊胚形成率进行比较。 结果程序化冷冻组和玻璃化冷冻组之间的存活率、卵裂率、囊胚形成率均没有显著性差异(P0.05),但是受精率存在显著性差异(P=0.05);程序化组与自配液组、成品液组之间的存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率之间均没有显著性差异(P0.05)。程序化组移植了4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植了7例,获得1例生化妊娠。 结论程序化慢冻与玻璃化冷冻方法均可以应用于人类成熟卵母细胞,玻璃化冻存人卵母细胞具有更大的发展趋势;构建出初步的可应用于人卵母细胞冻存的玻璃化冷冻技术,冻融后的卵母细胞具备正常的受精能力及卵裂能力。 第四部分人类三原核囊胚玻璃化冷冻技术研究 目的比较不同冷冻载体及运用玻璃化冷冻和程序化冷冻两种不同的冷冻方法对人类三原核囊胚冷冻复苏的效果,观察复苏后的存活率及继续发育的能力,为建立可靠的囊胚玻璃化冷冻保存方法奠定基础。 方法将接受IVF/ICSI治疗的患者3PN发育获得的囊胚随机分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组。玻璃化冷冻组又分为自制麦管组和cryoleaf组,比较各组之间囊胚复苏后的存活率、扩张囊胚率及囊胚孵出率。 结果程序化冷冻组和玻璃化冷冻组的回收率、存活率、扩张囊胚率及孵出囊胚率之间均没有显著性差异(P0.05)。自制麦管组和cryoleaf组之间回收率存在显著性差异(P0.05),而存活率、扩张囊胚率及孵出囊胚率之间没有显著性差异(P0.05)。 结论玻璃化冷冻人类囊胚技术平台已经基本建立,可以应用于临床。
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R318.52

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