收藏本站
《安徽医科大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

当归补血总苷的研制及对实验性肺纤维化的干预作用和分子机制研究

高建  
【摘要】: 特发性肺纤维化(Idiopathic pulmonary fibrosis ,IPF)是一种原因不明、以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱最终导致肺间质纤维化为特征的疾病。主要临床表现是逐渐加重的呼吸困难,伴有刺激性干咳,病情一般持续进展,最终因呼吸衰竭而病死,其发病率和死亡率很高,预后极差。IPF的发病机制尚未明了,然而目前肺纤维化治疗尚无特效药物,IPF已成为临床治疗的难点。研究肺纤维化发病机理和寻找行之有效的治疗药物是目前医学界迫切需要解决的课题。 中医经典名方当归补血汤由当归、黄芪组成,两者均有抗肺纤维化作用。前期研究表明,对于博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型,当归补血总苷能明显减轻肺泡炎症和纤维化程度。本课题拟观察肺纤维化形成过程中胶原基质重塑在IPF发病机制中的动态变化,探索IPF防治新的作用靶点。同时在整体水平上研究当归补血总苷对IPF胶原基质重塑的调控作用从而探讨其对IPF的防治作用及机制,研究当归补血总苷对实验性肺纤维化形成过程中TGF-β1等细胞因子的影响,以及对MMPs和TIMPs局部表达失衡的调节作用,和其对TGF-β1/Smads信号转导通路的影响,为中医药益气活血协同抗肺纤维化提供现代科学依据。 目的制备当归补血总苷并建立其质量控制标准,优选当归补血汤中有效部位的提取工艺,建立当归补血总苷HPLC指纹图谱,并以此考察当归补血总苷的质量。观察当归补血总苷对实验性肺纤维化大鼠肺系数及肺组织病理形态的影响以及血清中HA,LN,PCⅢ、CⅣ,TGF-β1,COLⅠ和IL-13水平的变化;探讨肺纤维化大鼠肺组织中MMP-1、MMP-9与TIMP-1 mRNA的改变,并观察当归补血总苷对肺纤维化大鼠肺组织、MMP-1、MMP-9与TIMP-1表达的影响;探讨PF模型中体内成纤维细胞表型转分化和TGF-β1-Smad3途径在肺纤维化发生发展中的作用,阐明当归补血总苷对肺成纤维细胞表型转分化及TGF-β/Smads信号转导通路的影响及其机制。 方法采用薄层色谱法对当归补血总苷中的黄芪甲苷和阿魏酸进行定性鉴别;采用紫外分光光度法测定当归补血总苷的含量;采用HPLC法测定当归补血总苷中的黄芪甲苷、黄芪苷Ⅱ和阿魏酸的含量。设计L9(34)正交试验,采用HPLC法测定黄芪甲苷、阿魏酸的含量作为质控指标,考察乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取时间(C)和提取次数(D)4个因素对当归补血总苷提取的影响,优化提取工艺。采用HPLC-DAD,Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),乙腈―水二元梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,(λ=203 nm),柱温为30℃,建立了当归补血总苷的HPLC指纹图谱。180只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、强的松组和当归补血总苷大、中、小剂量组,每组30只。除正常对照组外,其他五组均采用经气管滴注博莱霉素A5建立大鼠肺纤维化模型,造模后第二日起当归补血总苷大、中、小剂量组每天用当归补血总苷(剂量64、32、16 mg·kg-1)灌胃,强的松组用醋酸强的松混悬液(剂量3 mg·kg-1)灌胃,每日一次,每组分别于7、14和28天随机处死10只大鼠采集肺组织,观察各组光镜、电镜(当归补血总苷组中剂量组)下的病理学变化以及比较各组肺系数,以及血清中HA,LN,PCⅢ、CⅣ,TGF-β1,COLⅠ和IL-13水平的变化。RT-PCR法检测当归补血总苷对肺纤维化大鼠肺组织MMP-1、MMP-9与TIMP-1 mRNA表达的影响;Western blotting和RT-PCR法分别检测大鼠正常组、模型组、当归补血总苷组不同组别中a-SMA、TGF-β、COLⅠ、Smad3、P-Smad3等蛋白及mRNA的表达。 结果黄芪甲苷在0.85~6.76μg之间呈良好的线性关系(r=0.9992),平均回收率为97.53%,RSD为0.82%。黄芪苷Ⅱ在1.05~8.4μg之间呈良好的线性关系(r=0.9994),平均回收率为94.82%,RSD为2.16%。阿魏酸在0.07~0.53μg之间呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为99.74%,RSD为1.62%。最佳提取条件为采用8倍量70%乙醇提取2次,每次2h。建立的当归补血总苷的HPLC指纹图谱确定了12个共有峰,各峰相对保留时间的RSD在0.2~1.0%之间,相对峰面积的RSD在1.6 ~3.2%之间。结果发现,不同批次当归补血总苷质量基本稳定,通过HPLC指纹图谱能够较好地控制其质量。与模型对照组相比,TGDGBX (16-64 mg·kg-1)及强的松组肺系数明显降低(P0.01),肺组织病理观察显示肺泡炎及肺纤维化程度均明显减轻;TGDGBX (16-64 mg·kg-1)能显著降低BLM诱导的PF大鼠血清中升高的的HA,LN,PCⅢ和CⅣ水平,显著降低PF大鼠血清中IL-13含量,且造模后7、14和28 d三个时间点均有效。TGDGBX (16-64 mg·kg-1)可抑制BLM诱导的肺纤维化大鼠肺组织在肺纤维化不同阶段MMP-1 mRNA、MMP-9 mRNA的表达,提高TIMP-1mRNA的表达,使MMPs/TIMPs表达趋于平衡。进一步研究发现,TGDGBX (16-64 mg·kg-1)可以显著降低PF大鼠血清中升高的TGF-β1和COLⅠ水平。TGDGBX (16-64 mg·kg-1)可明显抑制肺纤维化不同阶段肺组织α-SMA和TGF-β1的表达,抑制肺组织升高的α-SMA、TGF-β1、COLⅠmRNA和蛋白的表达水平;下调肺纤维化不同阶段肺组织升高的Smad 3、P-Smad 3蛋白和Smad3 mRNA水平。 结论该提取工艺稳定性和重现性良好,简便,快速,可行;本方法制备的TGDGBX质量可控,检测方法精密度、重现性良好,准确,适用于TGDGBX的质量控制。TGDGBX能减轻肺泡炎性水肿、保持肺泡结构及阻抑纤维化形成,能够明显减少博莱霉素诱导肺纤维化大鼠ECM的生成,提示其对肺纤维化有一定防治作用。TGDGBX抗PF可能与其降低血清中升高的TGF-β1水平、促进COLⅠ胶原降解作用有关。提示TGDGBX可能通过对调节MMP1、MMP9/TIMP1表达实现对ECM重塑的调控;TGDGBX可通过TGF-β1环节下调Smad3和P-Smad 3表达,降低COLⅠ表达,从而减少ECM胶原沉积,发挥抗PF作用。但TGF-β1/Smads的改变与MMPs/TIMPs水平的相关性等尚需进一步研究。
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:TQ461;R285

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 唐军;比色法测定黄芪中黄芪总皂苷含量[J];安徽中医学院学报;2004年05期
2 刘伯成,刘良,王永禄,陈国广,韦萍;当归补血汤的药理学研究进展[J];甘肃中医学院学报;2005年05期
3 魏路清 ,董彦;肺纤维化发病机制及治疗策略的新观念[J];国外医学(呼吸系统分册);2003年01期
4 曾鸣;范贤明;;成纤维细胞、肌成纤维细胞与肺纤维化[J];国外医学(内科学分册);2006年11期
5 安卓玲;;中药质量标准与现代分析技术在中药指纹图谱中的应用[J];黑龙江医药;2007年01期
6 江燕;晁若冰;;黄芪药材中黄芪甲苷和总皂苷含量的比较[J];华西药学杂志;2007年03期
7 刘涛,宋良文;肺纤维化发生的分子机制和早期防治研究进展[J];军事医学科学院院刊;2003年04期
8 刘金苹;翟乃亮;范贤明;高福泉;王晓芝;;JAK/STAT1信号转导通路在博莱霉素致肺纤维化大鼠中的作用[J];山东医药;2008年34期
9 张平,王金泉;转化生长因子-β族信号的转导[J];生物化学与生物物理进展;2000年04期
10 赵俊芳,刘成,刘成海;Smads蛋白及其介导的TGF-β胞内信号传导[J];生物化学与生物物理进展;2001年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 樊柏林;刘春霞;杨文祥;田辉;孙凡中;马弋;向继洲;;复方竹节参胶囊的毒理学试验[J];癌变.畸变.突变;2008年06期
2 胡燕平;王欣;宋捷;张旻;王秀文;李波;;五味子水煎剂的遗传毒性研究[J];癌变.畸变.突变;2009年04期
3 张旻;刘晓萌;宋捷;胡燕萍;王秀;李波;;五味子水浸提液对SD大鼠胚胎和胎仔的发育毒性研究[J];癌变·畸变·突变;2010年03期
4 王兰;张永东;梁涛;罗雁;郭红云;张晓文;;独一味胶囊对大鼠动脉管壁增殖细胞核抗原表达的影响[J];癌变·畸变·突变;2011年04期
5 刘文浩;骆延波;白福翥;;复合健鸡散超微粉促进雏鸡生长的临床试验[J];山东农业科学;2008年06期
6 王珍;董梁;李家春;萧伟;谢彩香;黄林芳;王振中;;茯苓产地适宜性分析研究[J];山东农业科学;2011年12期
7 于晓亮;王建华;;木瓜属植物果实中有效成分含量测定[J];山东农业科学;2012年02期
8 张相美;薛正莲;江荣珍;;一株林肯链霉菌变种生理特性的研究[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2009年01期
9 程子洋;王成永;;酒制木瓜炮制工艺研究[J];中医药临床杂志;2008年02期
10 彭耀;;中药饮片包装存在的问题及建议[J];中医药临床杂志;2009年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈文华;黄国栋;赵凤达;;姜黄水醇提取液对冰乙酸损伤性溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜保护作用及机制研究[A];江西省中西医结合学会第九次活血化瘀学术研讨会活血化瘀临床应用新进展培训班论文集[C];2011年
2 莘仲明;许学锋;陈浩;;二级反渗透工艺制取医药纯化水[A];第二届中国膜科学与技术报告会论文集[C];2005年
3 白雁;王星;龚海燕;张威;;近红外漫反射光谱法定量分析连翘药材[A];第十五届全国光散射学术会议论文摘要集[C];2009年
4 王星;左春芳;雷敬卫;白雁;;近红外光谱法在连翘产区鉴别中的应用研究[A];第十六届全国光散射学术会议论文摘要集[C];2011年
5 马维思;徐江;乔海莉;陈君;李向明;;化橘红GAP基地土壤绿僵菌的分离鉴定[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
6 乔海莉;徐荣;陈君;王霞;马维思;刘同宁;;肉苁蓉花序挥发物的化学成分分析[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
7 罗茂玉;;67份中成药说明书调查与用药安全[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
8 王东晓;朱曼;王欣荣;郭代红;;基于药品说明书解析β-内酰胺类抗生素皮肤过敏试验[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
9 洪小栩;李琦涵;;加强疫苗生产用Vero细胞的控制[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
10 王彬辉;石蕾;张晓芬;王金明;杨赛成;吴敏;章文红;;HPLC法测定瑞格列奈片的含量[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 帅学宏;山豆根多糖提取工艺及免疫学活性研究[D];甘肃农业大学;2010年
2 李会涛;《水产饲料生产良好操作规范》(GMP)技术管理体系构建与生产示范研究[D];中国海洋大学;2010年
3 姜登钊;中药百部归经的研究及其在海洋中药研发中的应用[D];中国海洋大学;2010年
4 张延妮;珠子参化学成分及其活性成分的筛选研究[D];陕西师范大学;2010年
5 生书晶;何首乌芪合酶基因(FmSTS)的克隆、鉴定及转化拟南芥研究[D];华南理工大学;2010年
6 孟庆霞;透射光谱成像技术在中药鉴定及快速无损检测中的应用研究[D];暨南大学;2010年
7 郑君;基于文献的中药毒性认识变化规律研究[D];山东中医药大学;2010年
8 付英杰;阿胶低肽及其制剂的研究[D];山东中医药大学;2010年
9 杨波;植物类中药寒热药性与化学成分相关性的文献研究[D];山东中医药大学;2010年
10 胡荣;白芷中欧前胡素提取分离及主要药效学研究[D];成都中医药大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 彭浩;秦巴山区虎杖中产白藜芦醇(苷)内生真菌的分离鉴定[D];华中农业大学;2010年
2 徐文平;四川绿茶苦涩味偏重成因分析及降低苦涩味技术研究[D];安徽农业大学;2010年
3 张燕;不对称Simmons-Smith反应合成S-(+)-2,2-甲基环丙烷甲酸甲酯[D];郑州大学;2010年
4 罗传军;含氮氧有机物为中性载体的PVC膜离子选择性电极的研究[D];郑州大学;2010年
5 马伟峰;2-甲氧基雌二醇口服制剂的研究[D];郑州大学;2010年
6 张军昌;骨髓来源的纤维细胞在特发性肺纤维化中募集及相关信号的研究[D];郑州大学;2010年
7 胡殿丽;木蝴蝶总黄酮提取工艺和脂肪酸成分研究[D];郑州大学;2010年
8 温媛媛;山茱萸中熊果酸的提取分离及其抗氧化活性研究[D];安徽农业大学;2010年
9 汪金菊;HPLC-FLD法检测鸡体内阿奇霉素残留及消除规律研究[D];安徽农业大学;2010年
10 周凡;中草药提取物对小鼠乳腺上皮细胞增殖作用的研究[D];安徽农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏尊喜;HPLC法测定不同产地决明子中大黄酚含量[J];安徽医药;2005年02期
2 龚梅芳,邹季,周秩难,邹定斌;当归补血汤对小白鼠四氯化碳所致肝损害的保护作用研究[J];北京中医;1993年01期
3 刘伟,郭素芳;黄芪联用复方丹参注射液治疗慢性乙肝临床观察[J];白求恩医科大学学报;1999年05期
4 李永春,何冰,陈建,王海斌,章巍;核因子-κB在大鼠肺纤维化中的活性和表达及红霉素治疗对它的影响[J];北京医科大学学报;2000年01期
5 邢旺兴,陈斌,宓鹤鸣,吴玉田,程荣珍;SFE-CGC法测定益肾灵颗粒中有效成分的含量[J];第二军医大学学报;2002年11期
6 姜晓宇,袁伟杰,任绪义,黄宝砖,肖雨龙,王浩;PDGF对大鼠肾小球系膜细胞表达PAI-1的影响[J];第二军医大学学报;2003年10期
7 潘勤,谢渭芬,张忠兵,张新,韩泽广;细胞外信号调节激酶对肝纤维化逆转的影响及其机制[J];第二军医大学学报;2005年09期
8 李军昌,赵建斌,刘颖格,成晓娟,马世平,王文,郑谨,夏天;当归补血汤血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖作用[J];第四军医大学学报;2003年05期
9 蒋明德;肝纤维化发生中的MAPK信号传导通路[J];第四军医大学学报;2005年08期
10 钟显飞,蒋明德,马洪德,曾维政,李小安;JNK信号通路对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖的影响[J];第四军医大学学报;2005年10期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 林全愧;阎嘉洁;计剑;沈家骢;;层层组装构建抗凝血和内皮细胞化协同功能界面[J];高等学校化学学报;2009年06期
2 孟紫强,刘玉香,武冬梅;二氧化硫对小鼠肺及血清中细胞因子的影响[J];中国公共卫生;2004年09期
3 刘盛辉,郎美东;新一代生物医用材料[J];高分子通报;2005年06期
4 ;项目转让[J];中国医药工业杂志;2006年07期
5 宋纯;黄玉东;姜再兴;侯艳;石玉波;;PGA细胞支架在大鼠胰岛体外实验中的应用[J];化学与粘合;2009年02期
6 田煦,朱家壁,王健松,李庭芳;粉防己碱静脉注射乳剂的制备及对实验性肺纤维化的治疗作用[J];中国药科大学学报;2005年03期
7 黄明华;陈庆华;刘美红;李自良;;组织工程支架材料研究进展及发展趋势[J];材料导报;2006年S2期
8 吴佳林;张钰;;多层静电纺丝技术制作血管支架[J];国外丝绸;2007年01期
9 耿文华;;急性矽肺的x线所见[J];铁道劳动安全卫生与环保;1980年04期
10 陆志英;王懋华;陈丽娟;施惠英;沈孝英;胡天锡;;铝尘对作业工人健康影响的调查[J];铁道劳动安全卫生与环保;1984年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赖晃文;赖日权;顾莹莹;田野;杨传红;刘芳;冯晓冬;王卓才;陈国勤;张伟;杨通;刘幕嫦;;SARS肺纤维化细胞外基质及间质效应细胞免疫表型研究[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年
2 张燕萍;樊茂蓉;王书臣;苗青;张文江;王伟;崔云;李艳艳;;肺纤平对博莱霉素所致肺纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响[A];中华中医药学会内科第十二次肺系病学术交流大会论文集[C];2006年
3 郑洪;蒋萍;陈佳宁;关景芳;于苏萍;袁玲;冯文茹;陶家驹;;三七总甙对大鼠肺纤维化的干预作用及其机制探讨[A];第十次全国中西医结合防治呼吸系统疾病学术研讨会论文集[C];2009年
4 孙增涛;刘恩顺;廉富;李小娟;封继宏;;益气活血散结法干预肺纤维化思路的提出与系统研究[A];中医药中青年科技创新与成果展示论坛论文集[C];2009年
5 孙增涛;刘恩顺;廉富;李小娟;封继宏;;益气活血散结法干预肺纤维化思路的提出与系统研究[A];自主创新与持续增长第十一届中国科协年会论文集(3)[C];2009年
6 黄山英;宋良文;张勇;孙丽;尹纪业;;Ⅳ型胶原和基质金属蛋白酶在大鼠早期肺纤维化启动中的作用机制[A];第六届全国生物医学体视学学术会议暨第九届全军军事病理学学术会议、第五届全军定量病理学学术会议论文汇编[C];2005年
7 辛建保;向菲;汪世灏;马万里;;黄芪对肺纤维化大鼠MMP-2和TIMP-1的表达的影响[A];第七次全国中西医结合呼吸病学术交流大会论文汇编(一)[C];2004年
8 周长福;李志军;刘红栓;;血必净联合前列腺素E1对肺纤维化大鼠转化生长因子-β1的影响[A];全国危重病急救医学学术会议论文汇编[C];2007年
9 杨珺超;宋康;陈君峰;鲁建锋;夏永良;;以肺纤维化为病理基础的肺气虚证大鼠模型的建立[A];全国中医内科肺系病第十四次学术研讨会论文集[C];2010年
10 张曼颖;吴艳峰;安继红;潘春芝;;姜黄素对大鼠纤维化模型的干预作用[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 王萍;董瑞让中医走向世界“肺纤维化”防治领域的前沿[N];健康报;2011年
2 张纾难;中药有助逆转肺纤维化[N];健康报;2003年
3 河北 刘涓;解读肺纤维化[N];家庭医生报;2009年
4 刘燕玲;抗肺纤维化中药进入临床试验[N];健康报;2003年
5 蔡国平;细胞外基质与经络[N];中国医药报;2001年
6 河北省职工医学院附属医院内科 刘涓;肺纤维化尤需防感染[N];健康报;2009年
7 北京同仁医院呼吸科主任医师 孙永昌;肺纤维化:明确病因是关键[N];保健时报;2009年
8 北京中日友好医院 张纾难;肺纤维化的治疗原则[N];中国中医药报;2000年
9 静雨 译;自发性肺纤维化新疗法[N];中国医药报;2002年
10 李 戎 闫智勇 唐 勇 李文军  王 兴 张天娥 刘明芳 罗蜀蓉;肺纤维化的中医药治疗综述[N];中国中医药报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高建;当归补血总苷的研制及对实验性肺纤维化的干预作用和分子机制研究[D];安徽医科大学;2009年
2 张彦萍;纤溶酶原激活物抑制剂-1siRNA抗博来霉素诱导的大鼠肺纤维化作用及机制[D];河北医科大学;2011年
3 李丽娜;CpG ODN对肺纤维化形成的作用及其可能机制[D];吉林大学;2010年
4 张波;肺纤方干预肺纤维化大鼠微血管新生的实验研究[D];北京中医药大学;2010年
5 卫伟;抑制活化素受体样激酶5对炎性肺损伤后细胞外基质代谢的影响[D];第二军医大学;2007年
6 魏路清;阿托伐他汀对实验性肺纤维化的保护及其MMP-9、TIMP-1表达影响[D];中国医科大学;2007年
7 倪莲芳;II类主要组织相容性抗原在肺纤维化的表达及其机制探讨[D];北京大学;2008年
8 杨毅;苈桃抗纤方对肺泡Ⅱ型上皮细胞转化的影响及作用机制[D];湖北中医学院;2009年
9 陈瑞;化纤汤对博莱霉素诱导的大鼠肺损伤干预作用的实验研究[D];湖北中医学院;2006年
10 杨俊玲;肿瘤坏死因子-α抑制剂及4种细胞因子表达在肺纤维化诊治中的应用与评价[D];吉林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王星;酒精与大鼠肺纤维化关系的研究[D];天津医科大学;2008年
2 刘威;黄芩苷对实验性大鼠肺纤维化的作用及机制探讨[D];河北医科大学;2005年
3 李新春;基质金属蛋白酶12在放射性肺损伤组织异常重建和肺纤维化启动中的作用及治疗靶点的探索[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
4 陈亚娟;TGF-β1诱导人胎肺成纤维细胞分泌血管内皮生长因子以及布地奈德的调控作用[D];四川大学;2007年
5 韩文阳;PAF受体拮抗剂对肺纤维化的抑制作用和可能的作用机理[D];中国协和医科大学;2006年
6 王凤强;地塞米松对平阳霉素致肺纤维化大鼠肺组织病理及血清TGF-β_1、IL-8动态变化的影响[D];山东大学;2010年
7 高明超;麻黄、五味子影响肺纤维化大鼠血管新生研究[D];北京中医药大学;2010年
8 杨雅茹;枇杷叶三萜酸对肺纤维化大鼠防治作用机制研究[D];安徽医科大学;2011年
9 叶旭军;结缔组织生长因子在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型中的表达及意义[D];武汉大学;2004年
10 赵成江;姜黄素对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化防治作用的实验研究[D];北京中医药大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026