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《安徽医科大学》 2009年
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日本血吸虫成虫可溶性抗原蛋白质谱鉴定与生物信息学分析

郑辉  
【摘要】: 目的:建立及优化日本血吸虫成虫的蛋白质组学分析方法,寻找可溶性蛋白组分中与免疫应答相关的特异性成虫抗原。方法:纯化日本血吸虫成虫可溶性蛋白,应用双向电泳(2D-E)结合免疫印迹技术,获得相应的电泳图谱和免疫印迹图谱,应用PDQuest双向电泳图像分析软件对图像进行分析比对,分析获得蛋白的理论分子量(Mr)和等电点(pI)等信息,标定特异性的抗原蛋白点;从中选取了30个蛋白质点,胶内胰蛋白酶酶切成多肽,利用LC-MS/MS质谱分析技术进行分析,并用SEQUEST软件搜索Schistosoma的非冗余蛋白质序列数据库。成功获得了24个蛋白斑点的肽指纹图谱(PMF)及肽序列检测数据,分属18种蛋白,运用生物信息学等技术在线分析这些蛋白的结构和功能。结果:日本血吸虫成虫可溶性蛋白经双向电泳后,考马斯亮蓝R250染色,电泳图谱显示了约152个主要蛋白斑点。其分子量分布约为14 kDa~134 kDa,pI主要集中在4.94~9.50。进一步用Western blotting鉴定,结果显示实验组图像可见的抗原抗体反应点数目约为57个,对照组为0个;对选定的蛋白质点进行脱色和胶内原位消化、酶解。酶解后的肽混合物经LC-MS/MS分析,获得肽质量指纹图,该图质量较高,峰信号较强,以m/z=200~2000间的片段峰较多,从获得的数据中解析出多肽序列信息,再通过数据库检索确定相应的蛋白质;通过Internet在线分析和生物信息学软件分析,获得这些蛋白的结构、功能相关信息,数据库检索结果表明这些蛋白主要与细胞运动、能量代谢、信号转导、蛋白折叠、修饰、合成等功能相关。对C4蛋白的编码基因、蛋白结构和功能做进一步的分析,序列分析结果提示该cDNA序列含有一个816 bp的开放阅读框序列,编码271个氨基酸,其编码蛋白的理论分子量为29.34 kDa ,pI为9.12。蛋白含有磷酸甘油醛脱氢酶样活性位点、N端NAD(P)结合区域、C端糖的运输和代谢的催化区域等保守结构功能域,具有潜在的抗原表位区域。结论:利用双向电泳分析技术、质谱鉴定技术和生物信息学分析了日本血吸虫成虫可溶性抗原,成功鉴定了多个日本血吸虫成虫抗原蛋白质,并展示其结构和功能。给研究日本血吸虫成虫抗原机制提供新的线索和思路,为今后日本血吸虫的蛋白质组学深入系统研究打下了基础,为开发抗血吸虫感染疫苗提供新的候选分子以及筛选新的免疫诊断抗原提供了可能。
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R392

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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10 张松江;急性力竭运动大鼠腓肠肌的蛋白质与蛋白质组差异性表达的研究[D];湖南师范大学;2006年
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