收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

特异性MUC5AC-siRNA表达质粒的构建及其对胆管癌细胞株HCCC-9810增殖及凋亡的影响的研究

任雪峰  
【摘要】: 自从RNA干扰现象被发现以来,RNA干扰技术因其沉默基因具有高效性、高稳定性、高度特异性等优点被广泛应用于基因功能研究、基因治疗和药物筛选等领域。MUC5AC是一种分泌型黏蛋白,正常表达于胃肠道、呼吸道和生殖道,对其起到润滑和保护的作用。MUC5AC在多种肿瘤中均有异常表达,可能在肿瘤的发生发展起到一定得作用。据报道MUC5AC可以作为诊断胆管癌的一种肿瘤标志物,但对胆管癌的发生发展是否起到了一定得作用还不清楚。本实验利用RNA干扰技术,针对MUC5AC基因的不同靶序列,构建了三个表达小发夹RNA得表达质粒,分别观察其在HCCC-9810中对MUC5AC基因的沉默作用,并研究抑制MUC5AC基因后对此肿瘤细胞生长及凋亡的影响,由此可以研究MUC5AC在MUC5AC相关肿瘤发生发展中的作用,并探讨其在MUC5AC相关肿瘤的基因治疗方面潜在的应用价值。 目的探讨MUC5AC特异性siRNA对人肝内胆管癌细胞珠HCCC-9810体外增殖及凋亡能力的影响。 方法设计合成三对特异性siRNA,构建了三个可在哺乳动物细胞中表达siRNA的表达质粒,pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1/2/3,应用脂质体转染技术分别将三个稳定表达的质粒和对照质粒(空质粒对照)转染HCCC-9810,同时此载体可独立表达DsRed荧光蛋白,转染后8至12小时在荧光显微镜下可通过直接观察荧光蛋白的表达来计算质粒的转染效率,而不影响siRNA沉默的效果,RT-PCR检测MUC5AC基因mRNA水平;SABC免疫组化染色技术检测MUC5AC粘蛋白的表达;MTT检测细胞生长增殖情况;流式细胞仪分析细胞凋亡。 结果基因测序表明成功构建质粒;转染后荧光蛋白表达率28.57%;RT-PCR结果表明在mRNA水平,三个质粒都可抑制MUC5AC基因的表达,并可使MUC5AC的表达下降,MTT结果对细胞的生长有一定的抑制作用,流式细胞仪分析结果使肿瘤细胞凋亡增加。 结论构建pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1/2/3质粒明显抑制了MUC5AC基因在mRNA水平及蛋白的表达,并可抑制肿瘤细胞的生长增殖和诱导其凋亡,为探讨MUC5AC在MUC5AC相关肿瘤的基因治疗方面奠定了一定的理论基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 黄文斌,袁平,林鸿民,徐国祥,齐琼;胃癌组织中黏蛋白MUC5AC的表达及其临床意义[J];诊断病理学杂志;2003年03期
2 吕海丽,郭永清,董震;MUC5AC在人类鼻息肉及下鼻甲黏膜上皮的表达[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2004年11期
3 黄静,冯玉麟,刘春涛,文富强,罗锋;蛋白激酶C参与调节肿瘤坏死因子α刺激大鼠气管上皮细胞MUC5AC蛋白的表达[J];中华结核和呼吸杂志;2005年02期
4 何韶衡;人呼吸道粘液分泌体外实验方法的建立[J];中国呼吸与危重监护杂志;2003年06期
5 徐晓艳,周向东;中性粒细胞弹性蛋白酶与黏蛋白[J];中国药物与临床;2004年10期
6 吴新华;陈剑;彭仕君;;MUC5AC在翼状胬肉组织中的表达[J];眼科新进展;2006年01期
7 徐曼 ,易永芬 ,李圆圆;大肠腺瘤MUC5AC、bc1-2和P53蛋白的表达及其意义[J];临床肿瘤学杂志;2002年04期
8 何新;周向东;;大环内酯类抗生素对气道黏液高分泌作用研究进展[J];中华哮喘杂志(电子版);2010年06期
9 张红凯,易永芬,李圆圆;三种粘蛋白在胃癌组织中表达及其临床意义[J];肿瘤;2003年01期
10 冯德辉,杨彬,林虹,周宇;胃癌组织中粘蛋白的表达及其临床意义[J];中国肿瘤临床;2004年11期
11 刘剑波,张珍祥,徐永健,邢丽华,张惠兰;白细胞介素13对小鼠支气管哮喘模型肺组织钙激活的氯通道gob-5和黏蛋白基因MUC5AC表达的作用[J];中华结核和呼吸杂志;2004年12期
12 戴幸平;刘昭前;蒋荣鑫;周兵;李家邦;;从PDGF、MUC5AC表达的变化探讨健胃愈疡颗粒剂对复发胃溃疡大鼠的作用机制(英文)[J];中国现代医学杂志;2009年01期
13 赵茂竹;郑洋;乔一平;;配戴软性角膜接触镜者结膜MUC5AC表达的改变[J];国际眼科杂志;2010年06期
14 安静;汪涛;文富强;;血栓素A2受体拮抗剂SQ29548对香烟烟雾提取物刺激人气道上皮细胞表达MUC5AC的调控作用[J];西部医学;2011年01期
15 李璐;丁剑锋;杨炜;;复发性翼状胬肉中MUC5AC的表达与泪膜稳定性的相关研究[J];农垦医学;2010年05期
16 李璐;杨炜;丁剑锋;张奕霞;;复发性翼状胬肉中MUC5AC与iNOS的表达及意义[J];眼科新进展;2011年07期
17 黄文斌,袁平,林鸿民,徐国祥,齐琼;胃癌组织中黏蛋白MUC2和MUC5AC的表达及其临床意义[J];实用肿瘤杂志;2003年01期
18 安锦丹,王静芬,申强,程慧,李志强,殷平;黏蛋白MUC1、MUC2和MUC5AC在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义[J];中华病理学杂志;2004年05期
19 毛翎,白春学,王悦虹,张敏;大鼠肺气肿组织表皮生长因子受体及黏蛋白表达的关系研究[J];中国呼吸与危重监护杂志;2005年01期
20 安锦丹;魏宝霞;史晓东;;卵巢浆液性和黏液性肿瘤中黏蛋白MUC5 AC的表达[J];牡丹江医学院学报;2005年06期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 卜晓东;李楠;田小强;李俐;王劲松;余小金;黄培林;;MUC2、MUC5AC蛋白表达与结直肠癌发生的相关性研究[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
2 安静;汪涛;文富强;;血栓素A2受体拮抗剂SQ29548对香烟烟雾提取物刺激人气道上皮细胞表达MUC5AC的调控作用[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
3 林晓萍;应英华;陈志华;李雯;沈华;;Keap1/Nrf2信号通路在铜绿假单胞菌脂多糖上调气道粘蛋白MUC5AC表达中的作用[A];2011年第三十三届浙江省呼吸系病学术年会暨呼吸疾病诊治新进展学习班论文汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王锋;钙离子激活的氯离子通道在慢性鼻窦炎中对黏蛋白MUC5AC表达的调控作用实验研究[D];复旦大学;2009年
2 邬海桥;茶黄素类对炎性气道分泌型黏蛋白5AC的影响及其作用机制的研究[D];重庆医科大学;2009年
3 董春玲;水通道蛋白5表达对支气管哮喘小鼠变应性气道炎症及黏蛋白合成、分泌影响的实验研究[D];吉林大学;2008年
4 应英华;转录因子Nrf2在香烟烟雾诱导粘蛋白MUC5AC表达中的作用[D];浙江大学;2012年
5 陈景德;化痰方对慢性支气管炎大鼠EGFR合成粘蛋白MUC5AC影响的研究[D];湖北中医学院;2005年
6 陈智鸿;AQP5对人呼吸道黏膜下腺细胞水跨膜通透性及粘蛋白合成、分泌影响的研究[D];复旦大学;2006年
7 沈瑶;水通道蛋白5敲除对呼吸道粘液表达谱的影响及其信号转导机制的研究[D];复旦大学;2010年
8 张子强;水通道蛋白5促进肺癌增殖迁移及参与肺上皮屏障的作用和机制研究[D];复旦大学;2010年
9 孙丽;羧甲司坦对慢性被动吸烟大鼠气道细菌负荷的影响及相关机制的研究[D];中国医科大学;2010年
10 吴秀艳;从痰浊阻肺大鼠模型初探痰邪致病机理[D];湖北中医学院;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 任雪峰;特异性MUC5AC-siRNA表达质粒的构建及其对胆管癌细胞株HCCC-9810增殖及凋亡的影响的研究[D];安徽医科大学;2009年
2 吴砚樵;慢性机械压力对MUC5AC表达的影响及信号转导机制[D];重庆医科大学;2010年
3 胡彬;慢性鼻—鼻窦炎鼻内镜术前术后黏蛋白MUC5AC与MUC5B的表达[D];中南大学;2011年
4 庄婷;粘蛋白(MUC1,MUC2,MUC5AC和MUC6)在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义[D];山东大学;2012年
5 张红凯;MUC1、MUC2、MUC5AC和E-钙粘附素在胃癌中的表达及意义[D];重庆医科大学;2003年
6 吴新华;翼状胬肉与泪膜功能异常[D];暨南大学;2004年
7 刘文申;MUC5AC,EGFR在胆囊结石胆囊的表达及意义[D];南昌大学;2008年
8 王煜;MUC5AC、MUC16和MUC17在多囊卵巢综合征中的表达研究[D];内蒙古医学院;2010年
9 童瑾;祛痰类中药有效成份对慢性气道炎症黏液高分泌的影响[D];重庆医科大学;2005年
10 李丹;体外实验中AGR2基因对MUC5AC表达的影响[D];泸州医学院;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978