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黄芪提取物对脑缺血/再灌注损伤的影响及其机制研究

朱芬芳  
【摘要】: 目的:探讨黄芪提取物(EA)对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制。 方法: 1.采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察EA对缺血再灌注脑损伤大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积变化的影响;对脑组织SOD、NO活性和MDA含量变化的影响;免疫组化法测Caspase-3和GFAP蛋白表达的变化;RT-PCR法检测对局脑缺血再灌注大鼠脑组织FasmRNA、FasLmRNA表达的影响。 2.体外原代培养胎鼠海马神经元,建立缺氧/复氧诱导损伤的海马神经元凋亡模型,观察EA对损伤海马神经元的保护作用。进一步采用四唑盐(MTT)法和LDH释放法检测神经元细胞活力变化;采用结合Hochest33258、DNA琼脂糖电泳、流式细胞术检测对细胞凋亡的影响;采用激光共聚焦显微镜测神经元胞浆钙离子浓度变化;Western blot法检测AKT和p-AKT蛋白的表达作用。 结果: 1.模型大鼠在缺血再灌注d时神经功能评分最高,然后逐渐降低,EA(40 mg.kg-1)ig 3d可以明显降低模型大鼠神经功能评分。 2. TTC染色显示缺血再灌注大鼠脑组织梗死灶明显,EA(40 mg.kg-1)ig 3d、可以明显减轻大鼠缺血再灌注后脑梗死体积。 3.模型大鼠脑组织SOD活力明显降低,MDA含量明显升高;EA(40 mg.kg-1)ig 3d、7d可明显升高再灌注大鼠脑组织SOD活性、降低脑组织MDA含量。 4.模型大鼠脑组织Caspase-3表达增加,EA(40、80 mg.kg-1)给药组可明显降低再灌注大鼠脑组织Caspase-3水平,模型大鼠脑组织GFAP表达增加,EA(40、80 mg.kg-1)可进一步升高再灌注大鼠脑组织GFAP的表达。 5.缺血再灌注模型组大鼠脑组织FasmRNA、FasLmRNA表达明显升高, EA(40、80mg.kg-1)给药组可明显降低再灌注大鼠脑组织中FasmRNA、FasLmRNA表达。 6.缺氧/复氧损伤可成功诱导海马神经元凋亡,EA20、40 mg. L-1组均可提高损伤神经元的活力。 7.缺氧/复氧诱导神经元凋亡后,EA 20、40 mg. L-1能显著改善凋亡神经元细胞形态,EA 20、40 mg. L-1能显著降低神经元细胞的凋亡百分率。 8.缺氧/复氧可以诱导神经元胞浆内钙离子浓度升高,EA20、40 mg. L-1能使升高的胞浆钙离子水平降低。 9.各组海马神经元细胞中总的AKT含量无统计学差异,而p-AKT蛋白含量发生明显变化,缺氧/复氧海马神经元p-AKT蛋白含量较低,EA20、40 mg.L-1组p-AKT蛋白表达明显增加。 结论:黄芪提取物对脑缺血再灌注损伤后的神经元有一定的保护作用,其作用机制涉及抗氧化、减轻细胞凋亡、抑制细胞钙超载,抑制Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达、上调p-AKT蛋白表达等有关。


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