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《安徽医科大学》 2009年
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Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力T-bet及GATA-3的影响

谢娟  
【摘要】: 目的: 1.验证鼠源乙酰胆碱受体抗体α亚基97-116 (Rα97-116)肽段诱导建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型的可行性,为对重症肌无力(MG)进行进一步研究提供理想的实验动物模型。 2.验证Rα97-116 (V108A)鼻粘膜耐受对EAMG治疗效果,探索鼻粘膜耐受治疗的临床应用价值。 3.研究Th1、Th2细胞关键转录因子T-bet及GATA-3在正常组,模型组,耐受组中的表达变化规律,探究重症肌无力的发病机制及鼻粘膜耐受治疗理论依据。 方法: 将人工合成的鼠源肽段Rα97-116与完全氟氏佐剂(CFA)充分乳化混匀后多点皮下注入6-8周龄雌性Lewis大鼠,并在第30、60天强化注射与不完全氟氏佐剂(IFA)充分混合后的同等量肽段免疫制备EAMG大鼠模型。正常对照组则皮下注入等量的磷酸盐缓冲液(PBS)。通过称量实验大鼠体重,进行Lennon临床评分,低频重复神经电刺激(RNES)观察电衰减反应,ELISA法检测血清中AchR-Ab(IgG)滴度明确EAMG大鼠是否成模。将成模大鼠随机分为EAMG模型组、鼻粘膜耐受组,于第71-80天经双侧鼻腔分别滴注PBS液和含Rα97-116(V108A)肽段。耐受日起每日记录体重变化,隔日记录两组临床评分,至第95天结束观察。取外周血用RT-PCR检测PBMCs中T-betmRNA及GATA-3mRNA表达强度,ELISA测定血浆中IL-4、IFN-γ表达水平,AchR-Ab(IgG)含量。 结果: 1.造模Lewis大鼠中75%Lennon临床评分1分,3Hz、5 Hz低频重复神经电刺激电衰减反应D510%,血浆中AchR-Ab IgG滴度与正常对照组血清比值2.1。验证EAMG模型成模率达75%。 2.经Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受治疗后第15天,耐受组大鼠体重较模型组鼠明显增加,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。 3.耐受治疗后第10天开始,耐受组、模型组两组平均Lennon临床评分分别为2.1±0.32和1.55±0.27(P0.05)。 4. Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受治疗后第25天,耐受组AchR-Ab IgG(0.98±0.15)含量明显下降,与模型组(1.29±0.18)比较有统计学意义(P﹤0.05)。 5.模型组IL-4、IFN-γ的表达与正常组相比显著性增高(P0.05);耐受组经Rα97-116(V108A)耐受治疗后,IL-4、IFN-γ表达水平虽与模型组相比显著降低(P0.05),但仍较正常组略高(P0.05)。 6.模型组与正常组比较,T-bet和GATA-3 mRNA的表达显著增强(P0.05);耐受组经Rα97-116(V108A)治疗后,T-bet和GATA-3 mRNA表达水平与EAMG模型组相比显著减弱(P0.05)而与正常组相比较,差异无显著性(P0.05) 结论: 1.人工合成鼠源肽段Rα97-116免疫Lewis大鼠可成功诱导EAMG动物模型,成模率约为75%。该实验动物模型为MG的基础研究提供简便易得的研究动物。 2. Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受能明显改善EAMG大鼠的肌无力症状,为MG的治疗提供新途径。 3. T-bet和GATA-3在MG的免疫发病机制中可能具有关键性的调控作用,鼻黏膜耐受治疗作用可能与其下调T-bet和GATA-3的表达,抑制异常Th1和Th2反应从而下调AChR特异性T和B细胞异常的免疫应答反应有关。
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R746.1

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