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《安徽医科大学》 2009年
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应用TGF-β_1从rhG-CSF动员的外周血采集物中诱导产生CD4+CD25+调节性T细胞

上官志敏  
【摘要】: 目的:1)明确免疫磁珠法从rhG-CSF(human recombination granulocyte colony stimulating factor ,人重组的粒细胞集落刺激因子)动员的外周血干细胞采集物中分选CD4+CD25–T细胞和CD4+CD25+T细胞的可行性。2)研究rhG-CSF动员的外周血采集物中CD4+CD25–T细胞经转化生长因子β1(transforming growing factor-β1,TGF-β1)诱导产生CD4+CD25+调节性T细胞的可能性,进一步分析其表型,通过抑制试验评价其在细胞增殖方面的抑制功能。3)证明TGF-β1在CD4+CD25–T细胞转化为CD4+CD25+调节性T细胞中的作用。 方法:2007年9月—2008年9月间本院外周血干细胞移植术供者按照常规方法皮下注射rhG-CSF10μg/(kg·d),连续5天,在第5天动员达到高峰时采集外周血干细胞。收集10例采集物,为rhG-CSF动员后的外周血采集物(G-PB)。同时收集外周血干细胞移植术供者rhG-CSF动员前外周血(PB)10例。用免疫磁珠法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选出CD4+CD25-T细胞,评级分选效率,并用TGF-β1进行诱导,分别应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)、逆转录PCR(reverse transcription-PCR ,RT-PCR)和细胞增殖、抑制试验测定诱导后细胞的CD25、Foxp3表达和免疫抑制功能,比较2组之间CD4+CD25+T细胞转化率、抑制功能的差异。 结果:1)G-PB和PB用MACS的方法可以分选到纯度大于90%的CD4+CD25–T细胞。但是细胞的获得率并没有达到理想水平。2)分选得到的CD4+CD25–T细胞在抗-CD3 McAb和TGF-β1作用下CD25+分子表达不同,经FCM分析,分别为:(77.9±2.3)%和(65.7±4.2)%,差异有统计学意义(P0.05);3)RT-PCR检测,G-PB和PB来源的CD4+CD25–T细胞经TGF-β1诱导产生的CD4+CD25+T细胞和新鲜分离出的CD4+CD25+T细胞均表达Foxp3,且TGF-β1诱导产生的CD4+CD25+T细胞的Foxp3的表达量更高;4)经抑制试验分析,PB、G-PB来源的CD4+CD25–T细胞经TGF-β1诱导产生的CD4+CD25+T细胞均可以抑制健康献血者的单个核细胞的增殖,表明诱导后的细胞具有免疫抑制功能,3H-TdR掺入试验所得的cpm值分别为:11739±352和18732±437,阳性对照和阴性对照的cpm值为:38283±328、1300±94,差异有统计学意义(P0.05)。 结论:1)可以采用免疫磁珠法从rhG-CSF动员的外周血干细胞采集物中分选出CD4+CD25–T细胞和CD4+CD25+T细胞。2)TGF-β1在CD4+CD25–T细胞转化为CD4+CD25+调节性T细胞中起到重要作用,可以把来源于PB或G-PB的CD4+CD25–T细胞转化为CD4+CD25+T细胞,并且诱导后的细胞具有免疫抑制功能,RT-PCR显示有Foxp3表达。3)rhG-CSF动员的外周血可作为CD4+CD25+调节性T细胞的重要来源。
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R392

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