正常妊娠母胎界面免疫微环境的研究

【摘要】： 研究背景: 妊娠是一个复杂而又协调的生理过程。从免疫学的角度看,带有父方抗原的胎儿及其附属物作为一种半同种异体抗原组织,将引起母体免疫系统对其进行免疫识别及应答,却未受到母体的排斥而存活,相反母体与胎儿“和平共处”,这种特殊的状态即“母胎耐受”。此种免疫调节作用不仅发生于母体全身免疫系统,而且也发生在妊娠子宫局部,这种局部免疫因素的调节作用更直接地影响着母胎之间的相互作用。而由母体蜕膜组织和胎盘滋养层组织共同构成的母-胎界面是妊娠免疫耐受的基础。母胎界面处滋养细胞、免疫活性细胞及细胞因子形成母胎界面免疫微环境,为免疫耐受的形成和维持起了关键作用。在妊娠的不同时期,母胎界面免疫微环境表现为动态的平衡,在早期以及中期妊娠时,其局部的免疫微环境有利于妊娠的建立、维持以及胎儿的生长发育,至妊娠晚期,其局部的免疫微环境逐渐变化为分娩的发动作内源性准备。如果母胎界面免疫微环境改变导致这种免疫耐受机制失衡,将产生一系列的妊娠疾病及并发症如反复自发性流产、死胎、妊娠高血压综合征等病理妊娠情况。对上述问题的进一步阐明,将有助于理解生理妊娠,将为最终解决反复自发性流产、死胎、妊娠高血压综合征等病理妊娠问题提供理论依据。 目的: 检测正常妊娠孕妇早、晚及分娩期外周血、蜕膜中NK细胞在含量、表型方面上的变化,检测正常妊娠孕妇早、晚及分娩期外周血、蜕膜中CD4+CD25+T细胞的比例变化,检测正常妊娠孕妇早、晚及分娩期外周血、蜕膜中NK细胞胞内Th1/Th2型细胞因子的变化,探讨母胎界面免疫耐受形成与维持的可能机制。 方法: 1.收取正常妊娠早期、晚期、分娩期孕妇外周血各16例,密度梯度离心法分离单个核细胞,流式细胞仪检测妊娠各期外周血中NK细胞的含量、表型及CD4+CD25+T细胞的比例变化。 2.收取正常妊娠早期、晚期、分娩期孕妇蜕膜组织各16例,机械研磨法联合密度梯度离心法分离单个核细胞,流式细胞仪检测妊娠各期蜕膜中NK细胞的含量、表型及CD4+CD25+T细胞的比例变化。 3.流式细胞术检测正常妊娠早期、晚期、分娩期外周血及蜕膜中NK细胞胞内细胞因子IFN-γ和IL-4的表达。 结果: 1.外周血中的NK细胞是以CD56+CD16+为主,分娩期孕妇与妊娠早期孕妇和妊娠晚期孕妇相比,其外周血中CD3-CD56+细胞、CD56+CD16-细胞、CD56+CD16+细胞的百分含量均明显升高(P均0.05);而妊娠早期孕妇与妊娠晚期孕妇相比,其外周血中CD3-CD56+细胞、CD56+CD16-细胞、CD56+CD16+细胞含量均无显著变化(P0.05);妊娠各期的CD56+ CD16+/ CD3-CD56 +均无显著变化(P0.05)。 2.蜕膜中的NK细胞是以CD56+CD16-为主,妊娠早期孕妇和分娩期孕妇与妊娠晚期孕妇相比,其蜕膜中CD3-CD56+细胞、CD56+CD16-细胞的百分含量均明显升高(P均0.05);而分娩期孕妇的CD56+CD16+细胞、CD56+CD16+/ CD3-CD56 +与妊娠早期孕妇和妊娠晚期孕妇相比明显升高(P均0.05),但妊娠早期与妊娠晚期的CD56+CD16+细胞含量无显著变化(P0.05)。 3.流式细胞术检测各组外周血及蜕膜中CD4+CD25+T细胞的比例变化,结果发现正常妊娠过程中孕妇外周血中CD4+CD25+T细胞比例变化:妊娠早期较高(5.46±0.93),明显高于妊娠晚期(3.56±0.44 )及分娩期(1.93±0.52),分娩期最低,差异具有统计学意义(P 0.05);而正常妊娠过程中孕妇蜕膜中CD4+CD25+T细胞比例变化不同于外周血:妊娠早期(3.15±0.64)及妊娠晚期(2.92±0.62)高于分娩期(1.77±0.34),差异具有统计学意义(P 0.05);但妊娠早期与妊娠晚期差异无统计学意义(P 0.05)。 4.流式细胞术对各组外周血中CD3-CD56+细胞群进行二次设门,检测其胞内IFN-γ、IL-4的表达。结果发现正常妊娠过程中孕妇外周血NK细胞胞内IFN-γ的表达率为分娩期最高,明显高于妊娠早期及妊娠晚期,妊娠早期最低,差异具有统计学意义(P 0.05),而IL-4的表达率正好相反为妊娠早期最高,明显高于妊娠晚期及分娩期,分娩期最低,差异具有统计学意义(P 0.05), 5.流式细胞术对各组蜕膜中CD3-CD56+细胞群进行二次设门,检测其胞内IFN-γ、IL-4的表达。结果发现正常妊娠过程中孕妇蜕膜NK细胞胞内IFN-γ的表达率为分娩期最高,明显高于妊娠早期及妊娠晚期,妊娠早期最低,差异具有统计学意义(P 0.05),而IL-4的表达率为妊娠早期及妊娠晚期高于分娩期,分娩期最低,差异具有统计学意义(P 0.05),而妊娠早期与妊娠晚期差异无统计学意义(P 0.05)。 结论: 1.正常妊娠孕妇各期外周血及蜕膜中NK细胞在表型、含量方面均存在差异,提示妊娠期蜕膜与外周血中NK细胞亚群的变化趋势不同。 2.正常妊娠孕妇各期外周血及蜕膜中CD4+CD25+T细胞在整个孕期呈现不同的动态变化,参与介导和维持母胎免疫耐受及分娩发动的免疫机制。 3.正常妊娠孕妇各期外周血及蜕膜细胞内的细胞因子调节母胎界面的免疫功能和TH1/TH2的平衡。