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《安徽师范大学》 2010年
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环境激素中邻苯二甲酸二乙酯和邻苯二甲酸二环己酯的免疫分析方法研究

盛亚丽  
【摘要】:邻苯二甲酸酯作为增塑剂被广泛地使用于工业生产和塑料制品中,因此它们很容易积累在水体和陆地上,成为全球性最普遍的污染物之一,广泛存在于大气、水体、土壤、生物体等自然环境中。邻苯二甲酸酯是一类重要的环境激素,能进入动物体内产生类似雌性激素的作用,对动物生殖和发育相关的正常激素的合成、分泌、贮存、体内运输、结合及清除等过程产生阻止作用,干扰血液中激素正常水平的维持,从而影响动物生殖发育,具有致癌性、致畸性和致突变性。经文献调研发现,有关免疫分析方法测定环境激素物质的研究具有很大的发展前景,有待进一步研究。为此,本文研究的目标是建立测定环境激素类邻苯二甲酸二乙酯和邻苯二甲酸二环己酯的免疫分析新方法。围绕这一目标,主要进行了以下研究工作: 一、用合成的4-氨基邻苯二甲酸二乙酯和4-氨基邻苯二甲酸二环己酯通过重氮化的方法与牛血清蛋白结合形成全抗原,用全抗原免疫新西兰大白兔,在兔体内产生大量高效价的抗血清,通过双向琼脂扩散法和间接荧光免疫法检测抗体效价。双向琼脂扩散法效价达1 : 32,间接荧光免疫法检测抗体效价达1 : 25600。再进行兔颈部采血、离心分离、饱和硫酸铵盐析、纯化,得到邻苯二甲酸二乙酯和邻苯二甲酸二环己酯多克隆抗体IgG,-20℃低温保存备用。 二、建立了邻苯二甲酸二环己酯抗原包被间接酶联免疫竞争法和间接荧光免疫竞争法。这两种方法方法灵敏度高,选择性好,线性范围宽。酶联免疫测定法邻苯二甲酸二环己酯的线性范围为0.2~(-1)00μg L~(-1),最小检出限是0.02μg L~(-1),结构类似的邻苯二甲酸酯类化合物的交叉反应率小于10%。荧光检测邻苯二甲酸二环己酯,以异硫氰酸荧光素为荧光探针,在优化条件下,线性范围为0.1-200μg L~(-1),最低检出限为0.05μg L~(-1),交叉反应率小于10%。用这两种方法测定四种水样(自来水、湖水、长江水和饮料瓶沥出液)中的邻苯二甲酸二环己酯,结果令人满意。 三、建立了邻苯二甲酸二乙酯抗体包被间接酶联免疫竞争分析法。该方法灵敏度高,选择性好,线性范围为0.2-400μg L~(-1),最低检测限为0.08μg L~(-1),交叉反应率小于10%。四种水样检测得到的结果令人满意,酶联免疫法适用于监测水样中的邻苯二甲酸二乙酯。
【学位授予单位】:安徽师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:X832;O657.3

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