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《安徽师范大学》 2004年
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扬子鳄MHCⅡ类B基因研究及其皮革的DNA提取

史燕  
【摘要】: MHC基因是一个高度多态的基因群,主要包括三大类基因—Ⅰ类(Class Ⅰ)、Ⅱ类(Class Ⅱ)和Ⅲ类(Class Ⅲ)基因,它们无论在结构组成、表达组织的类型、刺激特定T细胞的类群及长期进化等方面都有所不同;Ⅱ类基因还可进一步分为A、B两个亚类:各类基因广泛分布于各种脊椎动物体内。MHC除了具有免疫功能外,还在其它许多方面起作用:MHC基因的多态性是最受关注的特征,尤其是Ⅱ类基因,因此可将MHC位点作为一种遗传标记,用于种群遗传结构和变异性的研究,这对于一些濒危物种的遗传保护起到重要的作用。 为了研究扬子鳄(Alligator sinensis)的MHC基因,本文利用一对简并引物扩增出扬子鳄MHC Ⅱ类B基因第二外元的部分片段,并对其进行了克隆及序列分析,结果得出10种不同序列,片段长166bp(其中一种为160bp)。通过序列比对发现序列的多态性较高,核苷酸序列中有38个变异位点,氨基酸序列中有23个的变异位点。同义(d_S)和非同义(d_N)替换率计算表明抗原结合部位(putative antigen-binding sites,pABS)的非同义替换明显高于同义替换。NJ法和MP法构建的系统树极为相似,10种序列聚为两支(A和B),分支B与凯门鳄的两种序列的亲缘关系较近。本文的研究结果表明扬子鳄MHC基因的多态性较高,这对扬子鳄饲养种群的遗传保护将非常有利。 利用不同的实验材料提取适合研究的DNA是保护遗传学研究的基础,而对于鞣制皮革,用常规的DNA提取方法很难提到适合于研究的DNA样品。本文研究出一种改进的DNA提取方法,成功地从扬子鳄鞣制皮革中提取了总DNA,同时对不同的组织标本如鳞片、盐腌生皮及尾尖皮等进行了DNA提取:并利用12S rRNA基因扩增的通用引物、扬子鳄鉴定性引物、微卫星引物及RAPD引物进行PCR扩增,且对部分PCR扩增结果进行测序,以检验提取效果。结果证明,运用这种改进的提取方法从鞣制皮革中提取的总DNA适合保护遗传学研究的需要,可用于部分序列的扩增和测序研究及扬子鳄皮质用品等的分子鉴定。同时其它几种皮质标本也都可提取出DNA,并且提取效果较好。
【学位授予单位】:安徽师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q953

【参考文献】
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