收藏本站
《厦门大学》 2001年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

钝顶螺旋藻转化与表达系统的建立

柯珍恋  
【摘要】: 蓝藻是原核生物,遗传背景相对简单,是很理想的真核基因表达受体,其遗传转化研究进展很快。应用穿梭质粒载体和基因整合平台系统已经成功地在多种蓝藻中实现了外源基因的表达。螺旋藻是一类丝状蓝藻,含有大量的蛋白质及其它人体所必需的营养物质,是少数已被确证可以安全使用的蓝藻之一,更适用于作为生产有用蛋白质的生物反应器开发,并制造可直接食用的基因工程产品。但是,螺旋藻作为外源基因工程受体的研究由于缺乏行之有效的遗传转化途径而始终进展缓慢。 螺旋藻内高活性的胞内核酸酶是外源基因转化螺旋藻的主要障碍。我们以供体质粒pEUTISI为主要的酶消化底物,通过多种方法处理螺旋藻细胞,然后检测其胞内核酸酶初提液对pEUTISI的降解作用。结果表明,2mmol/L以上的EDTA处理16h或无Mg2+螺旋藻培养基培养72h以上,都可以使处于对数生长期的螺旋藻胞内酶活性显著降低。低于28℃培养也可稳定降低螺旋藻的胞内核酸酶活性。综合以上结论,我们用2mmol/L的EDTA处理24℃培养的螺旋藻16-20h,结合超声波转化供体质粒的方法,建立了稳定的螺旋藻遗传转化途径。 用整合型质粒载体pEUTISI和pEUTR超声波转化螺旋藻,获得了稳定的具有G418抗性的螺旋藻培养系SP-I和SP-R,但藻株在形态上发生了一定的变异。以外源基因的两侧引物对转化藻的染色体进行PCR扩增,得到与阳性对照相同的DNA片段。以Km’基因为探针,对SP-I和SP-R进行Southern-blot鉴定,结果表明,SP-I的G418抗性确实是由于染色体整合了供体质粒Kmr基因所表达的。对SP-I蛋白质的SDS-PAGE凝胶电泳分析发现与预期外源目的基因——融合蛋白Ub-Tα1大小相当的特异蛋白条带。Western-blot结果表明,该特异带能与抗Tα1的抗血清结合,证实目的基因Ub-Tα1基因在转基因螺旋藻SP-I中获得了表达。 此外,我们分别建立了具有潮霉素和氯霉素抗性的两个克隆载体pAH和pKR。用质粒pDR2的潮霉素抗性基因替代质粒pUTK的Kmr片段,得到具有潮霉素和氨卞青霉素抗性的质粒pAH,该质粒含有蓝藻藻蓝蛋白基因的两侧同源片段L和R;以pKF3为出发质粒,插入蓝藻藻蓝蛋白的同源序列R 片段,得到具有氯霉黝性的整缄体邮。这两个含有抗性(潮霉素和氯 霉素)标记基因载体的构建,为螺旋藻更好地进行筛选转化工作打下了基础
【学位授予单位】:厦门大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:Q943.2

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 胡晓倩;唐欣昀;;抑制螺旋藻胞内核酸酶酶活的研究[J];水生生物学报;2007年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 周博;内蒙古螺旋藻热激蛋白基因的克隆及转化体系的初步研究[D];北京林业大学;2011年
2 文磊;无抗性标记转基因蓝藻的研究[D];厦门大学;2007年
3 王芬;钝顶螺旋藻表达载体的构建及转化研究[D];安徽农业大学;2008年
4 郑晓欢;人表皮生长因子hEGF在螺旋藻中的表达研究[D];厦门大学;2009年
5 朱一伟;钝顶螺旋藻luxAB表达载体的构建及电击转化研究[D];安徽农业大学;2009年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陆晓春,郭长英,胡守荣;转基因植物中的标记基因[J];东北农业大学学报;2000年01期
2 沈孝善,黄萍,李裕荣,董颖苹;当今转基因再生植物和转基因技术的研究进展[J];贵州农业科学;1999年06期
3 秦松,童顺,王希华,武建秋,张培军,曾呈奎,吴光耀,崔武,李亚菲;钝顶螺旋藻质粒的电镜观察及杂交研究[J];海洋与湖沼;1994年05期
4 秦松,王希华,童顺,曾呈奎;钝顶螺旋藻部分原生质体及单细胞的制备与培养[J];海洋与湖沼;1995年01期
5 秦松,曾呈奎;藻类分子遗传学和基因工程研究的现状和展望(Ⅰ)[J];海洋科学;1993年01期
6 姜鹏,秦松,曾呈奎;海藻基因工程进展(Ⅰ)[J];海洋科学;1998年02期
7 章军,宋新强,徐虹,陈天圣,楼士林;利用同源重组质粒pUTK转化蓝藻Synechococc us sp.PCC7942及胸腺素α_1的表达[J];海洋科学;2001年06期
8 郭祥学,赵晖,施定基,徐旭东,茹炳根;小鼠金属硫蛋白在聚胞藻中的金属诱导表达与纯化[J];生物工程学报;1998年04期
9 李乐农,郭宝江;螺旋藻的生物化学及其基因工程研究[J];生命的化学;1998年03期
10 闫培生,罗信昌,周启;丝状真菌基因工程研究进展[J];生物工程进展;1999年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢仁荣;;几种理化因子对一株野生丛粒藻生长的影响[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年09期
2 刘少华;蔡小宁;陈舒泛;戴婷;钱亮;;硒对异养小球藻生长及品质的影响[J];安徽农业科学;2006年09期
3 杨瑛;李全禄;姬艳红;郑文轩;;超声波处理在生物工程中的应用及展望[J];安徽农业科学;2008年04期
4 巫小丹;刘玉环;刘建强;刘茜;阮榕生;付桂明;;应用生物技术构建可持续微藻生物质能源生产体系[J];安徽农业科学;2010年13期
5 蔡尽忠;庄峙厦;谢增鸿;王小如;;聚球藻、盐藻荧光特性研究[J];安徽农业科学;2010年17期
6 张文婷;任越;张英俊;张志斌;;光生物反应器中集胞藻6803的光衰减及其生长动力学研究[J];安徽农业科学;2010年19期
7 刘云鹤;张钱宝;周鸣谦;许兵;;球等鞭金藻OA-3011积累脂肪酸的条件研究[J];安徽农业科学;2011年04期
8 施建乐;朱明新;蒋皎梅;徐炎华;;海洋硅藻叶绿素a测定方法的改进[J];安徽农业科学;2011年23期
9 刘苗霞;张颜睿;付凤玲;;标记基因在植物转基因中的安全性研究[J];安徽农业科学;2011年28期
10 杨勋;刘平怀;郝宗娣;时杰;张森;;富油微藻Monoraphidium sp.的分离及其油脂提取工艺研究[J];安徽农业科学;2011年32期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 励建荣;于平;;螺旋藻基因工程研究进展[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
2 庄南生;王英;唐燕琼;;超声波处理柱花草种子的生物学效应研究[A];中国热带作物学会第七次全国会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2004年
3 张春阳;张宏绪;;富铬、硒螺旋藻与富铬、硒酵母[A];中国微量元素科学研究会第十四届学术研讨会论文集(一)[C];2007年
4 王淑慧;汪靓;李继香;潘文灏;;微藻污水处理技术及其应用[A];2013中国环境科学学会学术年会论文集(第五卷)[C];2013年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 颜日明;聚球藻7942光自养本征生长动力学及其能量利用研究[D];华东理工大学;2011年
2 石凤敏;蒙古冰草MwLEA3基因功能研究及MwRRT基因的克隆[D];内蒙古农业大学;2011年
3 朱跃辉;聚球蓝藻7002类胡萝卜素的生理功能及其代谢工程研究[D];华南理工大学;2011年
4 苏青福;生态工业园风险识别与废弃物交换价格研究[D];天津大学;2012年
5 郑凯;斜卧青霉基因表达谱的差异分析研究[D];山东大学;2009年
6 师守国;苹果APX和GLDH转化兰州百合及兰州百合抗旱性研究[D];西北农林科技大学;2011年
7 李晋楠;螺旋藻种质与形态重建的分子遗传学研究[D];浙江大学;2002年
8 于平;极大螺旋藻藻蓝蛋白基因的克隆及其表达研究[D];浙江大学;2003年
9 方卫国;昆虫病原真菌降解寄主体壁酶基因的克隆及球孢白僵菌高毒力重组菌株的获得[D];西南农业大学;2003年
10 刘金姐;节旋藻藻蓝蛋白操纵子、Rubisco基因及节旋藻和螺旋藻分子系统学研究[D];中国海洋大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
2 孔凡敏;产油脂酵母菌株的选育[D];山东农业大学;2010年
3 张宽亮;含有红色荧光报告基因玉米CobA的T载体和表达载体构建研究[D];安徽农业大学;2010年
4 武昌俊;杜氏盐藻高产玉米黄素突变株的诱变筛选及生物学特性的研究[D];安徽农业大学;2010年
5 高莉丽;微藻的溶气气浮采收技术研究[D];中国海洋大学;2010年
6 江怀真;培养条件对海水小球藻生长及油脂积累的影响[D];中国海洋大学;2010年
7 潘瑾;温度和硅胁迫对三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)生长和脂肪酸组成的初步研究[D];中国海洋大学;2010年
8 谭扬;钝顶节旋藻(Arthrospira platensis AGB-AP02)全基因组测序及特性分析[D];中国海洋大学;2010年
9 张茜;蓝藻hox1基因和pcyA基因的克隆、序列分析及表达载体的构建[D];中国海洋大学;2010年
10 邢永泽;生态因子对萱藻(Scytosiphon lomentaria)孢子体、配子体生长发育影响的研究[D];中国海洋大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵荫农,曹骥,吴飞翔,欧超,袁卫平,莫钦国,韦薇,李瑗,苏建家,梁安民;EGF mRNA和EGFR mRNA在肝细胞癌组织中的表达及其意义[J];癌症;2004年07期
2 刘俊,张海燕,李玉晶,李卫红;表皮生长因子对人牙髓细胞增殖的影响[J];北京口腔医学;1999年03期
3 巩东辉;乔辰;李春霞;季祥;姜东成;;鄂尔多斯钝顶螺旋藻对三种抗生素敏感性研究[J];内蒙古科技大学学报;2007年01期
4 陈秋东,许永兴,徐志南;人表皮生长因子及其在化妆品中的应用[J];日用化学工业;2002年05期
5 李文蓉,武坚,史洪才,郭志勤;EDTA对绵羊精清中脱氧核糖核酸酶的抑制作用[J];草食家畜;1999年01期
6 易庆,王关林,方宏筠;人表皮生长因子(hEGF)基因合成及在枯草杆菌BS9920中分泌表达[J];大连理工大学学报;2002年01期
7 李清艳,施定基,陈翠丽,赵兴贵,邓元告,张越男,吕金印;重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)基因在鱼腥藻中的克隆[J];西北植物学报;2005年07期
8 魏兰珍;谭玮;王全喜;;启动子Pcpcβ提高鱼腥藻7120中hGM-CSF基因表达效率的研究[J];西北植物学报;2008年01期
9 印利霞,赵凯军,邢丽;重组人表皮生长因子治疗鼻中隔黏膜糜烂[J];中国耳鼻咽喉头颈外科;2005年05期
10 章军;徐虹;周克夫;刘仁海;朱小明;;转胸腺素基因螺旋藻的表达及免疫增强活性研究[J];福建农业学报;2005年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 江艳;无菌赤潮异弯藻的分离及生物学特性研究[D];安徽农业大学;2005年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 王芬;叶霁;曹媛媛;张海生;甘旭华;唐欣昀;;钝顶螺旋藻表达载体p215 t-spp的构建及转化[J];激光生物学报;2009年01期
2 武玉永;刘东东;信凯;姚庆收;;重组人表皮生长因子(hEGF)植物表达载体的构建(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2013年07期
3 李佳;汪安泰;陈婧;;利用水螅检测Cd~(2+)毒性的研究方法比较[J];水生生物学报;2010年04期
4 朱一伟;唐欣昀;;钝顶螺旋藻luxAB载体的构建[J];生物学杂志;2010年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 闻盼盼;集胞藻6803中S2P同源蛋白的定位与功能初探[D];华南理工大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 秦松;从第九届国际光合作用大会看藻类分子遗传学发展趋势[J];海洋与湖沼;1993年06期
2 秦松,童顺,崔武,王希华,李亚非,吴光耀,张培军,曾呈奎;红藻真江篱质粒的发现[J];海洋与湖沼;1994年04期
3 秦松,严小军,曾呈奎;藻类分子生物技术两年评──基因工程及其上游──分子遗传学[J];海洋与湖沼;1996年01期
4 秦松,曾呈奎;藻类分子遗传学和基因工程研究的现状和展望(Ⅰ)[J];海洋科学;1993年01期
5 陈颖,赵世民,孙勇如;藻类基因工程研究进展及展望[J];海洋科学;1997年04期
6 虞剑平,邵启全;根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的百脉根(Lotus corniculatus L.)的转化[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1990年03期
7 李宝健,许新萍,石和平,柯遐义;应用电注射法将外源基因导入水稻种胚及获得转基因水稻植株研究[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1991年03期
8 曾君祉,王东江,吴有强,张健,周文娟,朱小平,徐乃正;用花粉管途径获得小麦转基因植株[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1993年03期
9 王慧中,杜立群,黄发灿,李安生,邵启全;根瘤农杆菌介导的枸杞转化及转化植物的获得[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1993年04期
10 章军,吴巧娟,楼士林;CONSTRUCTION OF A NEW GENE INTEGRATION PLATFORM SYSTEM FOR THE SYNECHOCOCCUS SP.PCC7942[J];Chinese Journal of Oceanology and Limnology;1998年S1期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐道英;何复胜;陈蓉蓉;;螺旋藻的室外培养[J];贵州师范大学学报(自然科学版);1991年01期
2 张玉忠,时东霞,周百成,曾呈奎,庞世瑾;钝顶螺旋藻C-藻蓝蛋白分子的STM研究[J];生物化学与生物物理学报;1997年05期
3 杜林方,付华龙;钝顶螺旋藻藻胆蛋白的分离纯化及特性研究[J];四川大学学报(自然科学版);1994年04期
4 武宝 ,陈贻竹,臧汝波;钝顶螺旋藻的光谱特征及耐热的荧光研究[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);1994年01期
5 王翠红,辛晓芸,李日强,李海云,李春宇,徐建红;钝顶螺旋藻的培养及其生物学特性的研究[J];山西大学学报(自然科学版);2000年01期
6 胡一兵,刘辉平,胡军;几种水体污染因子对钝顶螺旋藻生长的影响[J];湖北民族学院学报(自然科学版);2001年04期
7 李日强,王翠红,席玉英,辛晓芸,徐建红,冯慧玉,郭平;钝顶螺旋藻对五种元素生物富集作用的研究[J];山西大学学报(自然科学版);2001年02期
8 马仁懿;;钝顶螺旋藻类囊体膜的叶绿素蛋白复合物的基本特性[J];中国农业大学学报;1990年04期
9 朱友芳,王大志,孔庆璞,罗云峰;生长素QS在钝顶螺旋藻养殖中的应用[J];台湾海峡;2000年03期
10 周爱堂;钦佩;张景襄;谢民;;罗非鱼对钝顶螺旋藻摄食、消化、吸收的示踪研究[J];海洋湖沼通报;1989年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 石寿海;陈志伟;高玲;贾玉辉;郭春生;王清吉;;海水钝顶螺旋藻多糖提取工艺研究[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
2 林重阳;沈晓文;徐虹;;钝顶螺旋藻Spirulina platensis两种不同形态藻丝体的光合作用和蛋白质差异表达分析[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
3 张晓辉;张学成;Yoshihiro Shiraiwa;;钝顶螺旋藻(节旋藻)OUQDS_6生长和pH周期变化的研究[A];中国藻类学会第十一次学术讨论会论文摘要集[C];2001年
4 田庚元;王仲孚;;钝顶螺旋藻多糖化学及生物活性的研究(摘要)[A];中国海洋生化学术会议论文荟萃集[C];2005年
5 吉晓佳;张大栋;庞延军;沈恒冠;曾昭琪;杨永华;;多胺对螺旋藻生长与代谢的调控研究[A];江苏省遗传学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年
6 张季平;王新泉;李乐农;常文瑞;桂璐璐;郭宝江;梁栋材;;钝顶螺旋藻C-藻蓝蛋白单斜晶系晶体结构研究[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
7 邱丽氚;;大螺旋藻营养成分研究[A];2004年北方七省市植物学年会论文集[C];2004年
8 张晓辉;张学成;Humitake Seki;Yoshihiro Shiraiwa;;钝顶螺旋藻(节旋藻)OUQDS_6光合作用和生长特性研究[A];中国藻类学会第十一次学术讨论会论文摘要集[C];2001年
9 刘燕;谭萼辉;朱丹丹;梁志杰;彭方;葛飞;;钝顶螺旋藻对Zn~(2+)和Cd~(2+)的耐受性及吸附特性[A];第六届全国环境化学大会暨环境科学仪器与分析仪器展览会摘要集[C];2011年
10 于平;励建荣;;钝顶螺旋藻超氧化物歧化酶分离纯化技术研究[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 余林;深圳太空农业初具规模[N];市场报;2006年
2 记者胡左;毛乌素发现神奇天然钝顶螺旋藻[N];科技日报;2002年
3 卢隆杰;螺旋藻的养殖技术[N];中国特产报;2006年
4 张强;保健食品领域一匹黑马[N];中国质量报;2008年
5 记者 黄世钊;北海发展海洋经济推进“一轴两翼”战略[N];法治快报;2007年
6 程元虎;螺旋藻的培养方法[N];中国渔业报;2007年
7 本报记者 王敏;太空作物让你饱眼福又饱口福[N];深圳特区报;2006年
8 记者胡左;内蒙古毛乌素沙地碱湖发现两个螺旋藻种[N];科技日报;2002年
9 浙江工业大学生物与环境工程学院 灵石金章银军;螺旋藻在饲料工业中的应用前景[N];中国畜牧兽医报;2008年
10 中安科技研究院 卢隆杰;螺旋藻的养殖技术[N];云南科技报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 巩东辉;鄂尔多斯高原碱湖钝顶螺旋藻对低温、强光的响应[D];内蒙古农业大学;2013年
2 于红;钝顶螺旋藻多糖抗病毒及抗肿瘤作用的研究[D];中国海洋大学;2003年
3 杜玲;钝顶螺旋藻两个生态种多糖的抗菌、抗肿瘤活性及其机理的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
4 曹学成;螺旋藻染色体外DNA的克隆及结构与功能研究[D];浙江大学;2005年
5 鲁军;螺旋藻活性肽的纯化、鉴定及降压、护肝机制研究[D];北京林业大学;2010年
6 李平;螺旋藻和三角褐指藻的光生物学研究[D];汕头大学;2009年
7 王仲孚;钝顶螺旋藻糖缀合物的结构与生物活性的研究[D];华南理工大学;2001年
8 李晋楠;螺旋藻种质与形态重建的分子遗传学研究[D];浙江大学;2002年
9 李冰;钝顶螺旋藻/节旋藻藻蓝蛋白的提取纯化及抗肿瘤免疫效应研究[D];中国海洋大学;2006年
10 关翔宇;藻蓝蛋白组合生物合成及蓝藻连接多肽生物进化研究[D];中国海洋大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨玉娟;钝顶螺旋藻生长及固碳过程的影响因子研究[D];江南大学;2013年
2 夏旗;钝顶螺旋藻对沼液的处理与利用[D];西南大学;2011年
3 慧敏;钝顶螺旋藻培养及其对富营养化水体中氮磷的去除[D];内蒙古大学;2013年
4 柯珍恋;钝顶螺旋藻转化与表达系统的建立[D];厦门大学;2001年
5 吴海燕;阳光紫外辐射对经济蓝藻钝顶螺旋藻光合作用的影响及其机制研究[D];汕头大学;2010年
6 陆晓鸿;钝顶螺旋藻对磺胺类抗生素的敏感性和降解规律研究[D];浙江工商大学;2014年
7 余景;极大和钝顶螺旋藻对Se(Ⅳ)的吸收和代谢[D];暨南大学;2004年
8 许宝青;钝顶螺旋藻中荧光藻蓝蛋白的分离纯化[D];浙江大学;2003年
9 田柳;富铬、富铁、富锌螺旋藻培养方法和食用安全性研究[D];湖北工业大学;2013年
10 刘冰;钝顶螺旋藻多糖抗乙型肝炎病毒的实验研究[D];青岛大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026