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《厦门大学》 2006年
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哈维氏弧菌胞外产物及鞭毛蛋白的研究

陈雅芳  
【摘要】: 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi )是一种能产生单极端鞭毛的革兰氏阴性杆菌,它是海水养殖中常见的致病菌,由其引起的弧菌病是水产养殖经济动物中最为严重的疾病之一,其爆发性流行可导致多种海水养殖鱼虾贝类大量死亡,造成巨大的经济损失。本论文致力于哈维氏弧菌胞外产物及其鞭毛蛋白免疫原性的研究,主要结果如下: 1.以网箱养殖的患溃疡病青石斑鱼(Epinephlus awoara)和斜带石斑鱼(E. coioides)分离的哈维氏弧菌TS-628菌株为研究对象,采用平板玻璃纸覆盖技术,获得该菌株的胞外产物(Extracellular product,ECP),并对其成分进行分析。杯碟法研究表明,哈维氏弧菌TS-628菌株的胞外产物具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、卵磷脂酶等多种酶活性和溶血活性,且溶血性物质具有热不稳定性。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及考马斯亮蓝R-250染色分析表明,ECP蛋白谱带主要集中在分子质量范围25.0~66.2kDa之间,经不同时间培养所获得的ECP在凝胶上显示出的蛋白带几乎一致。采用复性电泳方法(G-PAGE)分析了哈维氏弧菌及其它4种弧菌属细菌的ECP蛋白酶活性,结果发现哈维氏弧菌ECP在酸性条件下(pH4),蛋白酶活性较强,在碱性条件下(pH9),蛋白酶带明显减少,活性很弱。在相同的pH条件下,5种弧菌中以副溶血弧菌的ECP蛋白酶活性最强,种类多,分子质量范围宽;而哈维氏弧菌的蛋白酶带较少,活性也稍弱。 2.采用梯度离心和CsCl等密度超速离心法提取并纯化哈维氏弧菌TS-628菌株的鞭毛蛋白(flagellin)。电镜观察到鞭毛蛋白呈经典的中空丝状结构,这与其他学者报道的细菌的鞭毛蛋白形态相似,电镜下几乎不见杂质,表明所提纯的鞭毛蛋白纯度还是比较高。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及考马斯亮蓝R-250染色分析表明,纯化的鞭毛蛋白亚基分子量分别为43、43.5和44kDa。以纯化的鞭毛蛋白免疫新西兰大白兔制备抗血清,dot-ELISA检测兔抗鞭毛蛋白抗血清效价为1:25000,表明所提的鞭毛蛋白具有较强的抗原性,免疫新西兰大白兔约2个月,即可产生高效价的抗血清。Western-blotting印迹检测发现只有相对分子量为43、43.5和44kDa的3条鞭毛蛋白带出现强阳性反应,没有检
【学位授予单位】:厦门大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S941

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