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稳定同位素碘标记-ICP-MS在免疫分析中的应用

李景喜  
【摘要】: 随着生命科学的进步,免疫分析法获得了不断的发展。近来,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)在免疫分析中成为人们关注的一个检测手段。由于电感耦合等离子体质谱具有灵敏度高、检出限低、线性动态范围宽、干扰较少等优点,并可以进行多元素同时快速分析,因此在高通量的生物免疫检测方面具有广泛的应用前景。本工作中研究了稳定同位素碘标记蛋白技术,建立了电感耦合等离子体质谱免疫碘标记蛋白分析方法,并将该法应用到特异性免疫蛋白检测和致病性菌检测中。论文共有四个部分组成:1.文献综述;2.稳定性同位素碘标记蛋白;3.碘-127标记-电感耦合等离子体质谱用于免疫分析;4.蒸气发生-电感耦合等离子体质谱法测定碘。 第一章通过文献综述介绍了免疫分析方法的发展状况及其在各领域的应用,阐述了免疫分析的标记方法及进展,并对免疫分析发展趋势作了扼要论述,突出了电感耦合等离子体质谱在免疫分析应用中的可行性。 第二章研究稳定性同位素碘-127标记蛋白的方法。介绍了不同的碘标记方法及其发展情况,并对各种碘的标记方法进行了比较;研究中采用溴代琥珀酰亚胺法实现非放射性碘-127对蛋白的标记:溴代琥珀酰亚胺是一种比较温和的氧化剂,并在均相中进行反应,标记反应步骤简便,标记率高、标记物稳定、活性好,实验证明是一种理想的碘标记方法。 第三章主要介绍了稳定性碘标记-电感耦合等离子体质谱用于免疫蛋白分析。研究中首先以兔抗大肠杆菌为抗原,羊抗兔IgG蛋白为抗体,对羊抗兔IgG蛋白进行碘标记,然后进行免疫反应,以电感耦合等离子质谱进行检测,建立了免疫蛋白检测的碘-127标记-电感耦合等离子体质谱免疫分析法。另外,对免疫微孔板进行了修饰实验;建立检测前碘标化合物的处理方法,防止碘的挥发和碘的记忆效应。最后,使用该方法对致病性菌的免疫蛋白分析作了尝试,获得一定理想的效果。 第四章主要建立了一种在线化学蒸气发生-电感耦合等离子体质谱测定碘的方法,利用碘负离子的还原性,采用氧化还原手段,将碘负离子氧化为碘单质;然后通过碘单质的易挥发特点,将碘蒸气直接导入等离子体。即采用化学蒸气发生法(Chemical Vapour Generation)进行进样,与传统的雾化进样相比,能更有效地引入样品,提高了样品传输效率和检测灵敏度。该方法的建立还对碘的形态作了尝试,对碘负离子和碘酸盐进行检测。 本研究工作的创新点: 1.为电感耦合等离子体质谱检测法与免疫方法相结合完成了非放射性碘127标记蛋白的研究。实验中采用溴代琥珀酰胺(NBS)法,实现了稳定性同位素碘标记蛋白方法的建立;方法采用非放射碘标记,克服了传统方法中碘放射性对操作者带来的危害和困难等。 2.将电感耦合等离子体质谱检测法与免疫方法相结合,建立了免疫蛋白检测的碘-127标记-电感耦合等离子体质谱免疫分析法,并实现该方法在特异性免疫蛋白检测和致病菌检测中的应用。 3.建立一种在线化学蒸气发生-电感耦合等离子体质谱测定碘的方法。即采用化学蒸气发生法(Chemical Vapour Generation)进行进样,能更有效地引入样品,提高了样品传输效率和检测灵敏度。


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