收藏本站
《厦门大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

乙酰辅酶A羧化酶α-CT亚基accA基因表达载体的构建及在杜氏藻中超量表达的研究

任妮  
【摘要】: 生物质能源的开发利用是缓解我国能源和环境压力,建立可持续发展能源系统的有效措施。在众多生物中,藻类具有生物量大、生长周期短、易培养以及脂类含量高等特点,是制备生物质能源的良好材料。本实验室选择杜氏藻(Dunaliellabardawil)作为研究对象,对杜氏藻进行分子生物学改造,将外源编码脂肪合成关键酶——乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)的α-CT亚基accA基因整合到杜氏藻染色体上,并让目的蛋白大量表达,以期提高杜氏藻该酶合成脂类的能力,从而获得脂类含量高并且能够稳定遗传的杜氏藻株。 本实验克隆了大肠杆菌ACCase的accA亚基,并成功构建原核表达载体pGEX-6P-1-accA,将载体转化到大肠杆菌中,通过SDS-PAGE发现目的蛋白在大肠杆菌中成功大量表达,表达量都占菌体总蛋白的29.4%,主要以包涵体形式存在。 构建表达质粒载体p-accA-CAT,该载体能在原核生物大肠杆菌中大量克隆,又能在真核生物中超量表达,含有报告基因CAT,氯霉素作为抗性标记。使用超声转化、电击转化和基因枪三种转化方法将表达质粒转入杜氏藻中。以accA基因片段两侧序列设计引物对转化藻株的基因组DNA进行PCR扩增并测序,证明目的片段已经进入到宿主细胞中。进行SDS-PAGE,通过凝胶电泳分析发现与预期外源目的基因表达产物大小相当的35KD左右的特异蛋白条带,蛋白扫描结果显示目的蛋白占总蛋白的15.8%,通过Western blot进一步证实了此特异蛋白的存在。基因枪法获得的转化藻株至今都能稳定遗传外源基因,并且转化藻在氯霉素抗性压力下和野生藻的生长速率大致相同,这说明虽然外源基因能够稳定的存在和表达,但是其整合对杜氏藻的正常生长影响并不明显。 尽管外源基因accA能在杜氏藻细胞中稳定存在与表达,但是用索氏提取法测定转化杜氏藻的总脂含量并无明显提高。但本研究结果具有一定理论意义和应用价值,为高油脂藻种培育开辟了一条新技术途径,为以后的转基因研究积累了经验。
【学位授予单位】:厦门大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:Q943.2

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨其光;;生物质能及其开发利用[J];安徽科技;2005年12期
2 王成军,黄少杰;国外燃料乙醇工业的发展现状及其对我国的启示[J];工业技术经济;2005年05期
3 耿德贵,王义琴,李文彬,孙勇如;GUS基因在杜氏盐藻细胞中的瞬间表达[J];高技术通讯;2002年02期
4 朱建良,张冠杰;国内外生物柴油研究生产现状及发展趋势[J];化工时刊;2004年01期
5 秦松,张健,李文斌,王希华,童顺,孙勇如,曾呈奎;用基因枪将GUS基因导入褐藻细胞中表达[J];海洋与湖沼;1994年04期
6 武建秋,秦松,邓田,郭晓林,曾呈奎;氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因在海带中的表达[J];海洋与湖沼;1999年01期
7 魏学锋,张小云,罗婕,田学达;生物质燃料的开发利用现状与展望[J];节能;2004年08期
8 张龙;杜风光;史吉平;闫德冉;董青山;;生物柴油研究与应用现状及展望[J];江苏化工;2005年06期
9 胡秋龙;刘灿明;吴苏喜;刘祥华;曾凡佳;;生物柴油的应用近况和发展前景[J];粮食科技与经济;2006年01期
10 姚专;侯飞;;我国生物柴油的发展现状与前景分析[J];粮食与食品工业;2006年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 韦传宝;贾玉成;杜宇;;芋花叶病毒检测试剂盒的研制[J];安徽大学学报(自然科学版);2009年04期
2 张洋;;浅析青海省发展生物柴油产业的可行性[J];安徽农学通报;2005年S1期
3 张世敏;查国君;张无敌;尹芳;;一种绿色环保能源—生物柴油[J];安徽农学通报;2007年18期
4 张运锋;黄光和;李希国;谭学林;;普通菜豆农艺性状相关性分析及主成分分析[J];安徽农学通报;2008年07期
5 尹荣焕;尹荣兰;杨玉英;潘树德;苏振山;白文林;;PCR技术检测熟肉制品中沙门氏菌的研究[J];安徽农业科学;2006年02期
6 韩春春;王继文;魏守海;;乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的结构与功能[J];安徽农业科学;2006年03期
7 赵新亮;马强;;玉米SRAP反应体系的建立与优化[J];安徽农业科学;2006年15期
8 韩芬霞;;猪肝脏基因组DNA提取与纯化的研究[J];安徽农业科学;2006年16期
9 刘开华;王三保;邢淑婕;;食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测[J];安徽农业科学;2007年02期
10 刘爱荣;陈双臣;;农杆菌介导Ds转座因子的黄瓜遗传转化[J];安徽农业科学;2007年23期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李杰;薛乐勋;;杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5'侧翼区的克隆与功能分析[A];提高全民科学素质、建设创新型国家——2006中国科协年会论文集[C];2006年
2 陈秀蓉;杨成德;贾迎春;;西瓜细菌性果斑病菌的分离鉴定[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(三)[C];2007年
3 李智媛;屈淑平;崔崇士;;美洲南瓜AFLP反应体系的优化与建立[A];中国园艺学会南瓜分会西南地区南瓜产业化发展研讨会暨第三届会员代表大会论文集[C];2009年
4 南军;于海斌;石芳;隋芝宇;李佳;;甘油三酸酯的化学转化利用途径[A];第五届全国工业催化技术与应用年会论文集(下册)[C];2008年
5 李青;钟青萍;王丽;;海产品中副溶血弧菌的PCR快速检测方法的建立[A];“食品加工与安全”学术研讨会暨2010年广东省食品学会年会论文集[C];2010年
6 焦安英;李永峰;刘琨;;活性污泥利用甘蔗渣进行发酵产氢的特性[A];2010中国环境科学学会学术年会论文集(第四卷)[C];2010年
7 谈安群;钟广炎;江东;闫虎斌;王淼;;用抑制性消减杂交法分离兴春椪柑干旱胁迫诱导表达的cDNA[A];中国柑橘科技创新与产业发展战略论坛暨中国柑橘学会2007年年会论文集[C];2007年
8 魏兰兰;谷鸿喜;;16型人乳头瘤病毒衣壳蛋白在真核细胞中的表达[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
9 周兴;张居农;;蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达[A];中国奶牛协会2007年会论文集(上册)[C];2007年
10 魏庆宽;李瑾;傅婷霞;柏雪莲;崔勇;王用斌;张佃波;王洪法;付斌;刘玉冰;宰德福;黄炳成;刘克义;韩广东;;抗弓形虫感染DNA疫苗的研究[A];山东预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
2 张升祥;家蚕气味结合蛋白基因的研究[D];山东农业大学;2009年
3 李振东;东祁连山高寒草地优势植物内生细菌多样性研究[D];甘肃农业大学;2010年
4 姚小磊;基于TGF-β1与Bcl-2的抗干眼症中药高通量筛选体系的建立[D];湖南中医药大学;2010年
5 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 吕明;基于Zn/ZnO的两步式热化学准循环制氢系统基础性研究[D];浙江大学;2009年
7 张彦民;塔斯品碱抑制血管生成的作用及初步机制研究[D];西安交通大学;2008年
8 王鑫;微生物燃料电池中多元生物质产电特性与关键技术研究[D];哈尔滨工业大学;2010年
9 刘海臣;稻草秸秆同步糖化发酵制备纤维素乙醇的研究[D];中国矿业大学;2010年
10 齐力旺;华北落叶松体细胞胚胎发生与遗传转化系统建立的研究[D];中国林业科学研究院;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李珍宁;淡水藻的分离纯化与培养及藻体内生化成分的测定研究[D];华中农业大学;2010年
2 罗素娟;家蚕细胞周期依赖性蛋白激酶家族(CDK)的研究[D];浙江理工大学;2010年
3 陈晓平;家蚕30kD载脂蛋白19G1的表达和功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
4 刘静;家蚕BmycaCR基因的原核表达和亚细胞定位研究[D];浙江理工大学;2010年
5 葛红秀;家蚕钙磷蛋白(BmCAPS)的原核表达及定位分析[D];浙江理工大学;2010年
6 梁莉惠;家蚕BmCH基因的原核表达和亚细胞定位研究[D];浙江理工大学;2010年
7 王红娜;气升式反应器两步法生产生物柴油实验研究[D];郑州大学;2010年
8 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
9 张磊;杜氏盐藻(Dunaliella salina)GPI多克隆抗体的制备及其在MDCK细胞中的定位[D];郑州大学;2010年
10 梁晓艳;人脂联素基因的原核表达纯化、抗体制备及应用[D];郑州大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 彭荫来,杨帆;利用餐饮业废油脂制造生物柴油[J];城市环境与城市生态;2001年04期
2 陈冠益,方梦祥,骆仲泱,倪明江,岑可法;燃用稻壳流化床锅炉的试验研究及 35t/h 锅炉的设计[J];动力工程;1997年06期
3 冀星,郗小林,孔林河,李俊峰,李丽;生物柴油技术进展与产业前景[J];中国工程科学;2002年09期
4 冀星;王璇;;生物柴油 废弃油脂工艺利润可观 规模化发展看农林[J];国际化工信息;2005年12期
5 王义琴,陈颖,白琴华,赵世民,李文彬,孙勇如;以小球藻为载体生产兔防御素的研究[J];高技术通讯;2001年09期
6 翟学民;甘蔗渣锅炉设计新构思[J];工业锅炉;2000年02期
7 朱建良,张冠杰;国内外生物柴油研究生产现状及发展趋势[J];化工时刊;2004年01期
8 杨艳,卢滇楠,李春,曹竹安;面向21世纪的生物能源[J];化工进展;2002年05期
9 王铁军,常杰,祝京旭;生物质合成燃料二甲醚的技术[J];化工进展;2003年11期
10 范航,张大年;生物柴油试制研究[J];化学世界;2000年S1期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 曾泽国;;微藻传奇[J];小学科技;2011年08期
2 常国亮;成永旭;于智勇;刘强;;脂类营养对中华绒螯蟹幼蟹肝胰腺超微结构的影响[J];河南师范大学学报(自然科学版);2011年04期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘广发;张会永;林慧馨;;七种杜氏藻遗传相似系数初探[A];中国藻类学会第十一次学术讨论会论文摘要集[C];2001年
2 朱地琴;吴旭干;潘迎捷;成永旭;;脂类含量及脂肪酸组成的比较研究[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
3 应雪萍;贾守菊;张永普;倪小英;;瘤背石磺肌肉组织脂类及脂肪酸组成的季节变化[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第八次会员代表大会暨第十三次全国贝类学术讨论会论文摘要集[C];2007年
4 童微星;徐锡莲;雷引林;姚善泾;;环境因子对盐藻生长及其胞外多糖分泌的影响[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
5 林贞慧;庄静萍;陈功辉;;茵藤姜黄汤治疗湿热痰瘀型脂肪肝42例[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2002年
6 仲来福;;β-胡萝卜素的生物功能及健康效益[A];中国营养学会第三届老年营养暨第二届营养与肿瘤学术会议论文摘要汇编[C];1994年
7 孙婴宁;马飞;曲长庆;邵淑娟;于丽君;李庆伟;;日本七鳃鳗消化系统组织学与组织化学研究[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
8 杨敏;胡鸿钧;李夜光;;植胞类(Phytomonadia)新资料[A];中国海洋湖沼学会藻类学分会第七届会员大会暨第十四次学术讨论会论文摘要集[C];2007年
9 张学余;苏一军;李国辉;屠云洁;殷建玫;陆进宏;;丝羽乌骨鸡血清中部分脂类含量的测定[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
10 章清杞;李毓;陈键勇;杨仁崔;;特种功能稻——巨胚稻的选育与研究[A];2008中国作物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 康民;粗粮保健[N];大众科技报;2001年
2 王一娟 李冰;郑绵平:把盐湖变成“金湖”[N];经济参考报;2006年
3 是明启;长期吃素不利健康[N];中国医药报;2005年
4 周爱军;动脉硬化者不宜单吃素[N];大众卫生报;2006年
5 嘉琛;巧用陈醋排毒养颜[N];上海中医药报;2008年
6 酷儿;美容风尚尽收眼底,“纯净天然”是近年主打趋势[N];中国服饰报;2008年
7 王敬;高脂蛋白血症[N];中国中医药报;2006年
8 明白;动脉硬化者不宜单吃素食[N];大众卫生报;2005年
9 赵永春;孕妇吃蔬菜水果的学问[N];中国中医药报;2008年
10 ;郑绵平掘宝世界屋脊[N];大众科技报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 张辉;细鳞鱼稚鱼消化酶组织化学、营养需求与高脂饲料对生理机能影响的研究[D];东北农业大学;2008年
2 王培磊;胁迫因子对杜氏藻(Dunaliella)生长及其β-胡萝卜素积累的影响研究[D];中国海洋大学;2005年
3 戴军;杜氏盐藻多糖的提取、分离分析及其生物活性的研究[D];江南大学;2007年
4 郑云胜;LDL和PCS对羊精子冷冻效果及脂类含量的影响[D];内蒙古农业大学;2008年
5 张贵星;光诱导表达载体的构建及其在盐藻除草剂抗性转化中的应用[D];郑州大学;2003年
6 白林含;盐藻渗透调节与超微结构改变的研究及烯醇酶基因的克隆、分析和转基因烟草的鉴定[D];四川大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 任妮;乙酰辅酶A羧化酶α-CT亚基accA基因表达载体的构建及在杜氏藻中超量表达的研究[D];厦门大学;2009年
2 陈昱;开发杜氏藻生物质能源的初步研究[D];厦门大学;2008年
3 李亚清;海洋微藻多糖的提取分离纯化和结构特征研究[D];大连理工大学;2004年
4 黄建乡;盐藻β-胡萝卜素(顺)对鹌鹑实验性动脉粥样硬化和脂肪肝的治疗作用研究[D];青岛大学;2003年
5 钱文倩;微生物对异养小球藻生长及代谢产物影响的研究[D];上海交通大学;2008年
6 余杨;基于生物柴油制备的海洋高脂微藻筛选[D];厦门大学;2009年
7 王中利;播期、密度和追氮量对黑豆产量及品质性状的影响[D];安徽农业大学;2007年
8 马梵辛;盐藻Cbr基因组序列克隆及生物信息学分析与表达研究[D];四川大学;2004年
9 宏伟;LDL和PCS对绵羊精子冷冻效果及脂类含量影响的研究[D];内蒙古农业大学;2008年
10 谭静;克隆原核及真核生物耐盐相关基因研究[D];厦门大学;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026