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《福建农林大学》 2011年
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稻瘟病菌Rab5互作蛋白研究

林雄杰  
【摘要】:Rab蛋白约由200个氨基酸组成,形成一个保守的G结构域和高度可变的N端和C端,是真核生物保守的小G蛋白Ras超家族中最大的亚家族成员。蛋白质是通过囊泡运输来完成在胞内运输过程的,Rab蛋白作为囊泡运输的分子开关,与其上游调控因子和下游特定的效应子相互作用,在囊泡运输过程中起重要作用。Rab5主要定位在早期内涵体上,负责调控胞吞过程中胞吞泡与早期内涵体的融合。 我们先期研究表明MoRab5可能参与了稻瘟病菌侵染致病过程的调控。为进一步明确稻瘟病菌MoRab5的互作蛋白和调控网络,本研究构建了激活型的MoRab5-BD诱饵载体,通过酵母双杂交从稻瘟病菌cDNA文库中得到了MGG_05480、MGG_10315、MGG_06684、MGG_06683、MGG_06884、MGG_06587和MGG_03136共7个可能与MoRab5互作的基因。MGG_06587基因的QRT-PCR检测结果表明它在MoRab5缺失突变体中的表达量显著下降,在孢子和附着胞的的表达量与MoRab5相似,也显著下降,证明了MGG_06587与MoRab5间存在着一定互作关系。 同时,我们进一步构建了pET-28a-MoRab5融合蛋白表达载体,诱导表达并纯化pET-28a-MoRab5融合蛋白,通过His pull down技术,在稻瘟病菌Guy11总蛋白中筛选到40个可能与MoRab5互作的蛋白,其中6个在稻瘟病菌蛋白数据库中注释为:线粒体F1ATP酶的α亚基;线粒体ATP酶β链;α延伸因子; ADP核糖基化因子;海藻糖6磷酸合成酶亚基及actin,其余为假定蛋白。与酵母数据库比对结果发现,有9个在酵母中的同源蛋白与酵母中的Rab5蛋白可以互作。其中MGG_00431编码的蛋白在酵母中的同源蛋白是一种重要的COPⅠ外被体的包被蛋白,参与了从内质网到高尔基体的双向运输过程。因此,在稻瘟病菌中它也很有可能与MoRab5存在相互作用。 总之,本研究成功获得了若干可能与MoRab5互作的蛋白,为进一步筛选MoRab5的效应因子提供了良好的基础,同时也为明确MoRab5与其效应因子在信号通路中的协同关系,深入了解稻瘟病菌中MoRab5调控侵染致病的分子机制奠定了基础。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S435.111.41

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