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《福建农林大学》 2011年
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银耳菌袋中主要污染菌的分离鉴定及微生物的T-RFLP分析

张海风  
【摘要】:本研究以福建省古田县各产区的银耳为实验材料,采用T-RFLP技术,并结合传统平板培养方法分离、纯化受污染银耳中真菌,比较全面、系统地揭示了银耳栽培中污染菌的表型多态性和遗传多样性,为银耳病害的综合防治提供了科学的依据。 对于T-RFLP,本实验采用CTAB-蛋白酶K-液氮冻融法从已污染银耳中提取总DNA。以细菌的16S rDNA、真菌的ITS序列为靶基因,使用荧光引物进行PCR扩增,得到目的条带。分别对其PCR产物进行HaeⅢ和MspI的酶切消化,T-RFs使用GeneMarker软件处理。 经RDP数据库比对发现了37种细菌,同时也根据真菌的T-RFs初步分析了其群落多态性。根据T-RFs分析和比对的结果,可以认为污染的银耳中存在着包括以细菌、真菌群落为主的复杂微生物体系。T-RFLP可提供较为全面的微生物菌群组成信息,但菌种的分类地位与功能信息受到库容量的限制。本文的研究结果显示,对于本文的研究对象而言,T-RFLP是一种更为有力的工具,可提供大量非优势菌群的信息,为银耳病害相关微生物的鉴定、筛选提供理论和实践依据。 同时本文利用传统平板培养方法分离、纯化受污染银耳中的真菌,通过克隆转化测序,测得的真菌共22种,并对其生物学特性进行研究。生物学特性研究包括对菌落特征、分生孢子大小及形状、分生孢子梗着生方式等形态学特征的观察比较。比较不同菌株适宜的生活条件,包括温度、pH对菌丝生长的影响。结果表明:供试菌株有6类菌落形态,菌落颜色、分生孢子梗着生方式差别较大。各菌株最适生长温度有一定的差别,最适生长温度在25~35℃之间,最适pH差别不大,基本在5~6之间。 采用ITS测序技术对供试菌株进行种的区分。ITS测序结果表明:第Ⅰ类菌株共有5株,为好食脉孢菌;第Ⅱ类菌株共有2株,为小克银汉霉;第Ⅲ类菌株共有7株,为哈茨木霉;第Ⅳ类菌株共有3株,为长枝木霉;第Ⅴ类菌株共3株,为青霉;第Ⅵ类菌株共有2株,为曲霉。 本文首次在银耳微生物多样性研究方面采用T-RFLP技术,对栽培银耳中微生物群落的种类做出了快速鉴定,为银耳病害以及食用菌病害相关方面的研究提供了一种新的技术手段。并且在受污染的银耳内发现了一种新的霉菌-小克银汉霉,在银耳病害相关的研究上取得了重大突破。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S435.673

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