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《福建农林大学》 2012年
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草菇A因子及其多态性分析

邹锋  
【摘要】:本研究对草菇PYd15×PYd21进行了单孢分离,并通过本实验开发的SV标记从分离的单孢中选取出八个同核体单孢菌株作为实验的供试菌株。利用传统的两两配对的方式,对这八个单孢进行了配对实验,结合菌落形态标记和SV分子标记来验证配对结果。根据配对结果进行交配型分析,通过与典型的二极性交配反应模型对比,推导出草菇PYd15×PYd21符合二极性交配型的结论,并将八个单孢菌株根据交配型因子的不同分为A1因子和A2因子两类,其中V1、V4、V5、V17为一类,V2、V10、V14、V16为一类。 根据草菇PYd15×PYd21自交实验得到的单孢交配型A因子分类结果,以属于A1因子和A2因子的单孢作为标准菌株,分别和亲本为V0045的两个单孢V0115、V0116,亲本为V0032的两个单孢V0121、V0123,亲本为V0158的一个单孢D7,总共五个单孢进行第一轮配对实验。再将这五个来自其他亲本的菌株两两组合进行第二轮配对。两轮的配对实验后,结合菌落形态标记和SV分子标记验证,分析配对结果后,发现这五个单孢菌株的A因子类型均和标准菌株的A因子类型不同,即A≠A1且≠A2。并且在这五个单孢菌株中发现了四种不同类型的交配型A因子。加上标准菌株的两个A因子类型,本实验从来源于四个亲本菌株的不同单孢中共发现了六种不同的A因子类型,说明了草菇的A因子和大多数蕈菌一样,具有广泛的多态性。 在本实验室已获得了较为完整的草菇基因组信息,并且得到草菇PYd21-MIP基因片段全长及其定位的实验基础上,我们在MIP基因侧翼的基因中发现了草菇的A交配型位点,并实现了克隆拼接。通过NCBI同源性比对及蛋白质同源结构域分析,确定了该基因就是草菇的A交配型位点。另外,我们根据交配型基因mtA15和mtA21的序列设计引物,对草菇PYd15×PYd21出菇分离后获得的单孢V1、V2、V4、V5、V10、V14、V16、V17,根据交配型A因子的不同进行分类。发现引物PYd15-8和PYd21-2能够将八个单孢分为两类,其中V2、V10、V14、V16的A因子与PYd15相同,V1、V4、V5、V17的A因子与PYd21相同。而这一分类结果与通过配对实验推测出的这八个单孢的A因子分类结果相吻合。从而进一步证明了草菇交配型A因子的存在。另外,我们对mtA15和mtA21及其侧翼序列进行了分析,发现交配型A因子两侧的基因在两个单孢菌株中相当保守。但交配型A因子本身的序列却存在着广泛的多态性,几乎没有保守序列,从基因水平上证明了A因子具有多态性的结论。对草菇A因子多态性的研究,对于指导育种和进行遗传学研究都具有重要的意义。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S646.13

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【参考文献】
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