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《福建农林大学》 2012年
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芽胞杆菌脂肪酸生物标记测定条件的异质性研究

王子旋  
【摘要】:对39种芽胞杆菌模式菌株进行活化,扩繁后利用真空冷冻干燥保藏法对其进行保藏。定期对保藏菌株进行活性检测,结果证明,菌株的活性较好均可达到109个数量级,无杂菌污染,且菌落形态与保藏前一致,说明真空冷冻干燥保存法是一种较好的保藏方法。 用枯草芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌对MIDI微生物鉴定系统重复性和准确性进行验证,结果证明,MIDI鉴定系统的准确性和重复性均较好。每种菌的8个重复都可准确鉴定到种,且鉴定结果的相似性系数相差都在0.1之内。同时对影响脂肪酸提取的因素进行研究发现,当获菌量在20mg~50mg时,对MIDI鉴定结果影响不大;皂化试剂的用量在0.5~2.0mL时MIDI鉴定效果最好;皂化水浴时间控制在20~30min时,不会对MIDI鉴定结果造成影响;甲基化试剂用量在1.5~2.5mL之间时,对MIDI鉴定结果的准确性没有影响。 对33种芽胞杆菌利用MIDI微生物鉴定系统进行鉴定,除去MIDI系统数据库中没有的12种芽胞杆菌,剩下21种芽胞杆菌可准确鉴定到种的有15株,具体菌株为:FJAT-8753短短芽胞杆菌(Brevibacillus brevis)、FJAT-8754解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、FJAT-8755深褐芽胞杆菌(Bacillus atrophaeus)、FJAT-8757栗褐芽胞杆菌(Bacillus badius)、FJAT-8760蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)、FJAT-8783球形芽胞杆菌(Bacillus sphaericus)、FJAT-8771地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)、FJAT-8779短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)、FJAT-8786溶硫胺芽胞杆菌(Bacillus thiaminolyticus)、FJAT-10014嗜碱芽胞杆菌(Bacillusalcalophilus)FJAT8784枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、FJAT-8763凝结芽胞杆菌(Bacilluscoagulans)、FJAT-10017科氏芽胞杆菌(Bacillus cohnii)等,其他菌株都可鉴定到芽胞杆菌属。分析不同条件对MIDI鉴定系统准确性的影响发现,获菌量、培养时间和培养温度对鉴定系统的准确性影响表现为:培养温度培养时间获菌量,不同条件内对MIDI鉴定结果也不相同。 33种芽胞杆菌主要脂肪酸类型为:C_14:0iso、C_16:0、C_16:0iso、C_16:1ω11c、C_17:0ante iso、C_14:0、C_15:0iso、C_15:0ante iso,分析不同获菌量、培养时间和培养温度对每种芽胞杆菌脂肪酸种类和含量的影响发现,对脂肪酸种类的影响表现为:培养时间获菌量培养温度;对脂肪酸含量的影响表现为:培养温度培养时间获菌量。 最后,通过本研究总结出33种芽胞杆菌的最适鉴定条件,33种芽胞杆菌可用25种方法进行鉴定。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:Q936

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【参考文献】
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