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《福建农林大学》 2012年
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一种删除转基因水稻中外源基因新方法的初步建立

冯庆玲  
【摘要】:双T-DNA共转化系统和Cre/LoxP位点特异性重组系统是目前广泛应用的去除转基因水稻中选择标记基因的方法。本研究针对常用的双T-DNA载体的两个T-DNA以LB-RB—LB-RB正向串联的方式相连而导致两个T-DNA以非连锁形式插入水稻基因组概率较低的问题,将双T-DNA共转化载体的两个T-DNA改造为RB-LB—LB-RB反向相连的行式,以期提高两个T-DNA非连锁整合的频率;其次,将Cre/LoxP系统与双T-DNA载体结合,以期建立一种定点删除转基因水稻中外源基因的新方法。 分别以改造前和改造后的双T-DNA共转化系统为骨架载体,利用带有胚乳特异性启动子(Gluc和Gt1)的Cre/LoxP系统构建了4个植物表达载体,其分别以潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)为选择标记基因,以gus基因为报告基因。上述4个载体转化的水稻材料的分子及表达检测结果表明:改造后双T-DNA载体在转基因水稻基因组中非连锁整合的效率提高,分别为55.81%和51.28%,而改造前的双T-DNA非连锁整合的效率为47.37%和45.83%;并且双T-DNA非连锁整合的共转化植株自交后代都发生了基因分离,并筛选到了选择标记基因去除的转基因植株。这说明改造后的双T-DNA载体可提高两个T-DNA非连锁整合的频率,相应的提高了其自交后代中获得剔除标记基因植株的频率。其次,双T-DNA共转化载体结合Cre/LoxP系统可以实现水稻胚乳中外源基因的定点删除,并能在转基因植株中稳定遗传。因此,本研究建立了一种新的定点删除转基因水稻中外源基因的方法。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S511

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