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番茄上三种主要病原细菌的高通量检测

王婷  
【摘要】:以番茄上危害较大的3种病原细菌:番茄细菌性溃疡病菌Clavibactermichiganense subsp. michiganse(CMM)、番茄细菌性斑点病菌Pseudomonas syringaepv. tomato(PST)和番茄青枯病菌Ralstonia solanacearum(RS)为研究对象,分别以这3种细菌的基因片段作为靶标序列,以小鼠xist基因中的两段序列作为连接序列,根据设计原则设计锁式探针以及通用引物,优化并建立滚环扩增检测体系,并与常规PCR进行对比,比较二者的灵敏度和特异性;之后针对这3种病原细菌,建立起基于锁式探针的反向斑点杂交技术体系,并测试其灵敏度和特异性。 研究结果表明,根据番茄溃疡、番茄斑点、番茄青枯病原菌的特异序列和锁式探针的设计原则,设计出的3条锁式探针,通过对其特异性和灵敏度的检测,表明设计的这3条锁式探针特异性好,灵敏度高,可以实现对靶标序列的特异性检测;优化后的滚环扩增的体系,可以特异性地检测出这3种病原菌,而检测不出其他的病原菌,而且滚环扩增的灵敏度达到500fg/μL,比常规PCR高出1个数量级;结合地高辛标记的滚环扩增与反向斑点杂交技术,成功地检测出混合的3种番茄病原细菌,从而为这3种病原物的检测建立了新的方法,初步实现了对番茄细菌性病害的高通量检测。


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