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枇杷叶多酚提取、纯化及其抗氧化、抑菌活性研究

王建超  
【摘要】:本实验以枇杷叶为材料,采用溶剂提取法提取枇杷叶多酚类物质,并对其提取工艺进行优化提高枇杷叶多酚的提取率,然后对提取多酚类物质利用大孔树脂进行纯化,利用高效液相色谱法初步鉴定枇杷叶多酚类物质的组成,最后采用多种方法研究枇杷叶多酚的抗氧化活性和抑菌活性。研究结论:(1)利用响应面分析法,优化枇杷叶多酚提取工艺,结果表明料液比、提取温度和提取时间是影响枇杷叶多酚提取率的最主要因素,乙醇浓度影响最小,枇杷叶多酚最优提取工艺为料液比1:21,乙醇浓度48.5%,温度60℃,时间2.6 h,得到枇杷叶多酚实际提取率值为3.40%。(2)通过比较六种大孔树脂的吸附与解吸能力,选择D101大孔树脂来纯化枇杷叶多酚,通过静态和动态吸附实验,得到D101树脂纯化枇杷叶多酚的方案:多酚浓度为2.0 mg/mL的溶液进行上样,流速控制在2.0 mL/min:解吸剂选用60%的乙醇溶液,洗脱流速为1.0 mL/min,洗脱液体积为250 mL;最终收集合并100~200 mL之间的洗脱液,经过浓缩冷冻干燥得到枇杷叶多酚纯样粉末。该工艺经过验证,枇杷叶多酚的含量从13.23%上升到68.48%。(3)利用高效液相色谱分析法初步研究枇杷叶多酚的组成,研究发现枇杷叶多酚粗样和枇杷叶多酚纯样都含有五种相同的成分,分别是没食子酸、香草酸、丁香酸、阿魏酸、槲皮素。通过定量分析结果为枇杷叶多酚粗样中没食子酸、香草酸、丁香酸、阿魏酸、槲皮素物种单体的含量分别为:1.057 mg/g、1.197 mg/g、1.439 mg/g、2.234 mg/g、1.068 mg/g;枇杷叶多酚纯样中五种单体的含量分别为:12.731 mg/g、8.433 mg/g、 8.651 mg/g、9.477 mg/g、18.554 mg/g。(4)采用体外抗氧化实验,研究枇杷叶多酚粗样、纯样的抗氧化能力,并且以常用抗氧化剂抗坏血酸和应用最广泛的多酚类物质茶多酚作为对照。本研究的数据显示枇杷叶多酚显示出较好的清除DPPH、ABTS+、羟自由基、亚硝基的作用,并且还原能力显著,可以作为潜在的天然抗氧化剂的来源。(5)滤纸片法测定抑菌效果表明,纯化后枇杷叶多酚对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌两种细菌的抗菌效果最显著,并且随着多酚浓度的升高,抑制作用增加。枇杷叶多酚对枯草芽孢杆菌和铜绿假单孢杆菌的抑制效果较差,升高到一定浓度,其对枯草芽孢杆菌的抑菌效果趋于稳定,浓度较小时,对铜绿假单孢杆菌没有抑菌效果。通过肉汤微量稀释法测定最低抑菌浓度和最低杀菌浓度的实验结果表明枇杷叶多酚对大肠杆菌的MIC和MBC都为2.5 mg/mL、金黄色葡萄球菌的MIC为2.5 mg/mL,MBC为5.0 mg/mL、枯草芽孢杆菌MIC和MBC为5 mg/mL、对铜绿假单胞杆菌最差,其MBC达到40 mg/mL,MIC为20 mg/mL。


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