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《福建农林大学》 2015年
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鳗弧菌多克隆抗体和单克隆抗体的制备及其特性分析

王雪妹  
【摘要】:鳗弧菌感染鳗鲡、鲈鱼、黄鱼、鲑鱼、香鱼、大菱鲆、牙鲆、虹鳟、对虾等广大水产养殖生物,具有发病快,致死率高和流行广泛特点,给水产养殖业造成较大的危害,受到广泛关注,成为研究热点。制备鳗弧菌(SMW5)全菌灭活抗原,免疫新西兰兔,制备兔抗多克隆抗体血清,其效价达1:320000;对鳗弧菌检测灵敏度为1×104CFU/mL;与副溶血弧菌(ATC17802)、嗜水气单胞菌(JS01-1)和类志贺邻单胞菌(LCCi190625)有微弱的交叉反应;Western-Blot表明多克隆抗体与抗原的40 kDa蛋白有结合,与25-35 kDa的蛋白也有抗原抗体反应。所制备的3株单克隆抗体,其中1H9效价好、抗体分泌稳定、灵敏度高、特异性强,可应用于鳗弧菌ELISA或金标试纸条的研制。以灭活鳗弧菌(SMW5)全菌为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术,制备鳗弧菌单克隆抗体:细胞融合率达94.6%,融合阳性率达到62.4%;筛选得到3株单克隆抗体分别命名为1H9、1C12、6F8,阳性细胞株培养上清的效价分别为 1:6400、1:3200、1:800,细胞亚类分别为 IgG2a、IgM、IgG2b,对鳗弧菌(SMF5)的检测灵敏度分别为:4×103CFU/mL、2×103CFU/mL和 8×103CFU/mL。1H9免疫小鼠制备腹水效价为1:640000。单克隆抗体的交叉反应表明,单克隆抗体1H9、6F8和1C12均能与鳗弧菌(SMW5)、鳗弧菌(参考株)起阳性反应;单克隆抗体1C12与溶藻弧菌(Js60517NA1)、创伤弧菌(FJ04-L1)、嗜水气单胞菌(JS01-1)呈非特异性反应;单克隆抗体6F8与副溶血弧菌(A4C17802)、哈维氏弧菌(03152)、非0-1群霍乱弧菌(96-2)呈现非特异性反应;1H9与所检测的菌株均未出现交叉反应,表现出较强的特异性。稳定性试验表明3株单克隆抗体均表现出较好的稳定性。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S941.42

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