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《福建农林大学》 2015年
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几个水稻3'-UTR片段的克隆及鉴定

管其龙  
【摘要】:转基因作物中外源基因的存在是引发人们对转基因食品和生物安全的疑虑所在,应用植物来源的基因,特别是内源基因是消除公众疑虑最好的方法。另外目前广泛应用的转基因调控元件大部分是国外专利,这为我们转基因水稻的应用埋下了巨大隐患。培育具有自主知识产权的转基因品种必须拥有我国的自主专利。因此,挖掘和利用植物自身的基因及调控元件是促进我国转基因作物发展和应用的关键。本文基于水稻组成型表达体系,以水稻生物信息学数据库Rice Genome Annotation Project(http://rice.plantbiology.msu.edu/expression.shtml)为基础,获得野生型日本晴水稻基因芯片表达谱,并利用excel进行数据统计分析,初步筛选水稻中组成型表达且高表达的基因作为候选基因。利用RT-PCR技术分析各候选基因在茎、叶、花等组织中的表达水平,进一步筛选得到7个在水稻中高表达的组成型基因作为目的基因。通过NCBI数据库查询获得这7个目的基因的3'-UTR序列,利用PCR技术扩增得到基因的3'-UTR DNA片段,分别构建由35S和Ubiquitin启动子驱动的GUS基因连接这7个3'-UTR片段为终止子的植物表达载体,并以pCX35S-GUS-Tnos、pCXUbi-GUS-Tnos为阳性对照,通过烟草瞬时表达实验对目的基因的3'-UTR进行初步验证。采用农杆菌介导法获得转基因水稻植株,进一步对T1代转基因水稻的根、茎、叶、花及种子进行GUS组织化学染色分析,发现以7个3'-UTR为终止子的转基因水稻的根、茎、叶、花及种子中GUS蛋白都有较强的表达;转基因水稻的根、茎、叶、花及种子GUS蛋白酶活力与Tnos对照相比,其中编号为PL7的3'-UTR在各个部位的表达量均高于Tnos阳性对照。进一步验证了所筛选目的基因的3,-UTR对表达基因的调控水平。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S511;Q943.2

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