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《福建农林大学》 2018年
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SCSMV-P1蛋白抑制RNA沉默的关键结构域及氨基酸定位

梁姗姗  
【摘要】:RNA 沉默(RNA silencing)和 RNA 沉默抑制子(RNA silencing suppressor,RSS)是寄主和病毒之间长期进化过程中形成的防御和反防御的相互拮抗机制。甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)和小麦花叶病毒(Triticum mosaic virus,TriMV)都是属于马铃薯Y病毒科Potyviridae禾本科病毒属Poacevirus的成员,均通过编码P1来抑制RNA沉默介导的宿主防御,但是其抑制RNA沉默的机制至今仍然不清楚。本研究首先利用农杆菌浸润本氏烟的瞬时表达实验验证P1蛋白是强RNA沉默抑制子,明显提高了外源基因GFP表达活性。同时,还发现HC-Pro与P1共表达会大大降低P1的沉默抑制子活性。利用酵母双杂交Y2H和双分子荧光互补BiFC实验发现,P1与HC-Pro之间没有发生直接互作,表明HC-Pro可能通过间接方式来影响P1的沉默抑制活性。此外,P1与甘蔗和拟南芥泛素化途径中的关键蛋白质SKP1不存在直接相互作用。通过对P1蛋白的理化性质、蛋白质结构、保守结构域和位点以及选择压力等生物信息学预测分析,克隆构建了 11个缺失突变体和4个点突变子,其中这11个缺失突变体包括7个分段缺失突变体、2个保守结构域缺失突变体和N末端、C末端缺失突变体;4个点突变子包括2个保守位点和3个正向选择位点。利用GFP介导的农杆菌浸润本氏烟的瞬时表达实验表明,C末端15个氨基酸P1(△343-358)的缺失、2个保守氨基酸基序P1(△65-79),P1(△108-122)是P1发挥沉默抑制子活性的关键结构域。此外,正选择位点H263也是P1发挥沉默抑制子功能的关键氨基酸位点。本研究结果为进一步解析P1蛋白抑制RNA沉默的作用分子机制奠定了基础,也为探索SCSMV与寄主甘蔗互作研究提供了参考。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S432.41

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