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茶叶炭疽病病原菌的分离鉴定及防控技术

钟灵珅  
【摘要】:茶叶是山茶科植物,在我国是重要经济作物,而炭疽病严重影响了茶叶质和量,近年来在茶区呈逐年上升态势,致使茶叶枯萎,产量下降,威胁茶产业的可持续发展。鉴于该病害的重要性,本文从炭疽病的病原学出发,以病原鉴定为研究基础,从中分离鉴定引起炭疽病害的主要病原菌。随后对炭疽病原菌进行室内毒力测定,从现有9种药剂中选出对茶叶炭疽病比较敏感的药剂,并且以前期筛选到的生物菌肥芽孢杆菌B2为供试材料,进行茶园田间施肥,采集茶叶叶片进行内生菌分离、筛选、培养以及拮抗试验。上述研究可为今后深入了解炭疽病病害、制定防病措施、茶叶品质提升以及安全生产提供理论基础。主要研究结果如下:(1)从福建省宁德、周宁、龙岩3个茶区的茶叶上采集炭疽病发病明显叶片,采用组织分离法获得6株菌株,进一步培养纯化,待产孢后接种到健康叶片,与田间自然发病显现相似症状。对出现典型症状的叶片再次进行组织分离,获得相同病原菌,完成柯氏法则对分离物的鉴定,就此证明该菌是导致炭疽病的病原菌。(2)PDA培养7d左右,菌落中央凸起,菌丝致密呈绒毛状,菌落中心产橙色油状物质,中心灰色,边缘呈白色,培养基背部同心环状,中心沉积黑色素。通过镜检观察,分生孢子呈长椭圆形、椭圆形,无色,表面附着黑色颗粒。以传统的形态分类为基础,进行形态学鉴定,初步判定病原菌为炭疽菌。随后对分离的6个病原菌采用分子生物学技术,分别选用ITS、β-tubulin、LSU、GS和CglNT这5对引物进行PCR扩增和测序,通过序列比对,鉴定为刺盘孢属的炭疽菌。(3)为了筛选防治炭疽病的有效药剂,选取致病性强的由宁德地区分离的炭疽菌为例,采用生长速率法进行室内毒力测定试验。PDA平板上的抑菌试验结果表明,同一药剂其抑菌率随浓度的增大而增加,供试9种药剂中40%咪鲜胺、50%嘧菌酯、40%嘧菌环胺试剂对炭疽菌的效果最好,80%多菌灵抑菌效果最差。(4)施用菌肥后茶叶叶片内生菌数量显著增加,且其对茶炭疽病病原菌的拮抗能力与原菌株相当。对筛选的内生菌和芽孢杆菌B2进行16SrRNAPCR扩增、测序、比对、系统发育分析,两者的一致性达到99.93%,只有一个碱基的差异,确定两者为同一菌种,为芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)。结合形态学鉴定,证实供试芽孢杆菌B2定殖成功。(5)提倡茶园不用药,依靠科技进步和集成创新,采取茶园嵌套种植多种树木、作物的方式,增强茶园自然生态调控能力,抑制病害发生,修复茶园自然生态环境和生物群落系统,积极打造茶产业绿色发展新模式,打响“清新福建、绿色农业”茶叶品牌,构建防控技术体系。


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