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《福建农林大学》 2001年
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油离体再生体系建立及遗传转化的初步研究

宋刚  
【摘要】: 本研究以油(木奈)(Prunus salicina Lindl cv.Younai)为试材,进行了离体再生 体系的研究和遗传转化的初步探索。离体再生体系方面,建立了一个优化的茎 尖培养无性再生系统;建立了试管苗茎段直接再生不定芽的系统;进行了试管 苗叶片、子叶和上胚轴再生不定芽的探讨。遗传转化方面,发根农杆菌介导转 化试管苗茎段,诱导出了毛状根;根癌农杆菌介导ACO基因导入油(木奈)基因组, 并获得再生芽苗。主要结果如下: 1.茎尖培养无性再生体系的建立 取处于萌发生长阶段的油(木奈)枝条为接种外植体,消毒10min, 20d后,外植体的成活率达56.7%;最佳诱导培养基为, 外植体的分化指数达66.4%;最佳增殖培养基为 ,芽苗的增殖系数达4.5,芽苗最佳生长培养 基为,单芽可在一 代平均生长1.5cm;最佳生根培养基为, 生根率可达100%。芽苗增殖培养基中添加医用粉剂 ,可完全抑制继代中产生的内生菌。 2.茎段再生不定芽体系的建立 试管苗茎段诱导不定芽需要高浓度的细胞分裂素。茎段的最佳诱导培养基 为,茎节基段、 茎节中段和茎节上段的再生芽频率分别达100%、83.3%和62.5%,平均再生芽 数分别达6.50、4.25和3.80;起始阶段的暗培养和有助于茎 段不定芽的发生;茎节基段纵切后培养,不定芽的发生频率仍达100%,平均 再生芽数达4.25。 3.叶片、子叶和上胚轴再生不定芽的研究 诱导油(木奈)试管苗叶片再生不定芽,发生频率较低,本研究中最好的结果达 13.3%,是以为诱导培养基获得的,平均再 生芽数达4.0。 以油(木奈)子叶和上胚轴为起始外植体,外植体经不同的处理,不定芽再生情 福建农林大学硕士学位论文 摘 要 况有所差异。最佳诱导培养基为MS刊刀mg土”VBA刊刀mgL‘IAA,子叶纵 切片(表面刻伤)和子叶横切片(靠近子叶柄,表面刻伤)的再生芽频率分别 达 60.0o和 63.30,平均再生芽数分别达 3.ZI和 3.02。上胚轴横切段(]lgn插于 培养基)和上胚轴纵切片(切面朝下放置)的再生芽频率分别达76.3%和52.7%, 平均再生芽数分别达1.52和3.14。 4.发根农杆菌介导转化油棕诱导毛状根 发根农杆菌 M菌株和 R1601菌株对茎段的致根能力强于 R1000和 A菌株。 茎节基段作为转化受体远优于茎节上段、茎节中段或整株。M和R1601菌株以 直接接种法侵染茎节基段,茎节基段顺插于培养基时,毛状根的诱导率达57.4% 和58.3%,平均毛状根数达3.29和2.71;茎节基段倒插于培养基时,毛状根的 诱导率达 55.6O和 62.50,平均毛状根数达 3.00和 2.53。M和 R1601菌株以共 感染法侵染茎节基段,毛状根的诱导率达 19石%和 17.8%,平均毛状根数达 3.20 和 294。本研究中由油棕诱导出的毛状根未充分表现出典型的毛状根特征,且 毛状根未能进一步发生分化。 5.根癌农杆菌介导ACO基因转化油捺 pBIFI和 pBIO.吕经双酶切和 PCR扩增,证明了 ACO基因分别己以正向和 反向的方式克隆到了中间表达载体pBllZI上。经PCR鉴定pBI08和pBIFI也 己经整合到受体菌LBA4404、EHA105和AGLI菌株中。并以含pBIO.8的菌株 介导 ACO基因转化试管苗叶片和茎段。经 100mg·L”欠an的连续筛选,筛选到 6株抗性芽苗。同时也表明:LBA4404是较适合于介导转化油棕的菌株,而且 菌液稀释4倍,侵染20ndn,黑暗下共培养3-sd也是较优化的转化条件。抗性 芽苗经GUS活性和PCR检测,3株被初步确定目的基因己整合到了其基因组 中。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:Q943.2;Q943.1

【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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