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应用RAPD技术对(木奈)亲缘关系的探讨及红巴梨花青素生成相关基因f3h和dfr基因的克隆

张大生  
【摘要】: 论文第一部分对(木奈)基因组DNA的提取作出探索,并以此为模板对影响RAPD扩增的重要参数进行优化试验,建立了(木奈)RAPD反应的优化体系(PCR扩增体系条件是:20μl体积中,dNTP200μM、MgCl_22.5mM、随机引物0.2μM、DNA模板50ng、Taq酶1-2U)。用该优化体系对(木奈)、桃、李部分品种进行鉴定,并探讨了(木奈)与桃、李之间的亲缘关系。聚类分析结果显示,(木奈)并非是桃和李的杂交种,应当归于李属的一个种或变种。 论文第二部分以改良CTAB法从成熟红巴梨果皮中提取总RNA,并以此为模板,使用RACE方法成功分离出与花青素生成相关基因f3h基因cDNA的两个片段。该片段经拼接得到1095bp全长序列,并对序列进行了初步分析。核苷酸序列表明,该片段与苹果的f3h基因同源性高达97%。但用同样方法却未能从果皮中分离出dfr基因。


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