生防菌Bacillus cereus ANTI-8098A对青枯雷尔氏菌微生态致弱机理的研究

【摘要】： 细菌性青枯病是最重要的作物病害之一。本论文研究生防菌Bacillus cereus ANTI-8098A对细菌性青枯病原菌——青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)的微生态致弱作用，包括青枯雷尔氏菌的致病力分化及其在植株体内的分布；生防菌的生理生化特性、发酵培养特性及发酵控制技术；生防菌在不同条件下对构建的青枯雷尔氏菌强、无致病力混合群体的选择作用形成的微生态致弱作用；生防菌微生态致弱作用对细菌性青枯病的防治效果。 1．通过对田间采集的大量青枯雷尔氏菌株的致病力测定，表明其致病力存在明显的分化，即使在同一病株上亦有不同；对病株体内青枯雷尔氏菌分布的研究则表明在不同发病期植株体内的青枯雷尔氏菌浓度均随高度的升高而下降；试验还表明在花生的健康植株中也存在大量的青枯雷尔氏菌，这些菌在植株体内存在并繁殖，但并不导致植株的发病；通过分离纯化和多次的继代培养，获得了致病力长期保持稳定的强致病力菌株和无致病力菌株，作为后续试验的标准菌株。 2．对生防菌——蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus ANTI-8098A的培养条件研究表明其最适摇床培养条件为温度28±1℃、pH 7.5、10％装瓶量、转速200rpm，在此条件下以10％的接种量发酵36小时可达18.2亿／mL的孢子浓度。为了更好地进行生防菌的发酵，提高发酵水平，研究构建发酵控制系统，实现了温度、搅拌转速、溶氧等发酵参数的控制，程序控制方式可根据模拟设置计划在发酵不同阶段变动发酵参数；构建基于TCP／IP的远程监控系统，实现发酵系统的远程监控，50L发酵罐在此控制系统下发酵40小时可达57.6亿的孢子浓度，达到了生产需要的水平。 3．实验中分析了生防菌对青枯雷尔氏菌的致弱作用，并使用青枯雷尔氏菌强、无致病力标准菌株对生防菌Bacillus cereus ANTI-8098A的致弱作用进行测定，结果表明：生防菌处理对青枯雷尔氏菌强致病力菌株的致死中量LC_(50)为12.4％，较无致病力菌株低33.3％。强致病力菌株达到0.158的抑制增长率，比无致病力菌株高40.6％。在这样的差异影响下：特定浓度的生防菌的处理抑制了强致病力菌，使得无致病力菌株成为微生态体系中的优势群体，表现出生防菌的致弱作用，以实现控制病害发生的目的。 4．青枯雷尔氏菌强致病力菌株发酵液经不同稀释度的生防菌发酵液处理后，剪叶回接番茄组培苗和茄子盆栽苗，结果表明100-200倍稀释度对青枯病的控制效能达100.0％，300倍对番茄组培苗青枯病的控制效能达85.0％，对茄子盆栽苗青枯病的控制效能达75.0％；在使用灌根法诱发青枯病的条件下，通过生防菌液灌根对番茄和茄子的盆栽苗收到了良好的防效。