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茧蜂分子系统学初步研究

吕宝乾  
【摘要】: 茧蜂是农林害虫重要天敌,开展生物防治的有益资源。世界各地保存了大量的茧蜂标本,为了充分利用标本这一潜在的遗传资源,必须快捷、高效、低成本地提取基因组DNA,以便在分子水平上研究物种的起源、系统进化,生物多样性及天敌的引进、保护、释放等。 1.本文探讨了高温,氧化,化学修饰等影响茧蜂标本基因组DNA降解的因素,对室内保存寄生蜂标本提出应用含50mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)的无水乙醇固定,并在液面覆盖石蜡油等可行性建议。 2.通过对茧蜂标本DNA几种提取方法的比较发现,十六烷基三乙基溴化铵(Cetyltrimethyl Ammonium Bromide,CTAB)法效果最好。本文在原有CTAB法基础上进行了改进,使用优化的方法可以从保存近20年的乙醇浸泡标本中提取出DNA,该基因组DNA可很好地用于RAPD-PCR扩增。针插干标本DNA提取有待于进一步探讨。 3.建立了茧蜂RAPD分析的技术体系:25μl反应体系中,含10mmol/l tris-HCl(PH8.0),50mmol/l KCl,2.5mmol/l MgCl_2,150μmol/l dNTP,0.2μmol/l随机引物,30~60ng模板DNA,1.5U TaqDNA聚合酶。反应程序为:94℃预变性4min;94℃ 15s,36℃ 45s,72℃ 90s,45个循环;72℃维持4min。 4.在12个供试材料中,亚科之间具有多态性。对蚜茧蜂亚科下的4个属进行RAPD分析,25引物共扩增出159条带,多态条带比率(PPB)为75%。依据RAPD标记数据,对蚜茧蜂亚科4个属供试材料进行了聚类分析,结果表明:全脉茧蜂属Ephedrus Haliday和孔蚜茧蜂属Fovephedrus Chen关系最近,他们首先聚类在一起,然后和蚜茧蜂属Aphidius Nees聚在一起,最后是和少脉茧蜂Diaeretiella Stray聚在一起。与传统分类的结果相比分子系统发育关系基本相同。


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