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《福建农林大学》 2004年
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黄麻单染色体的分离和扩增及cDNA探针高通量筛选初探

谢小芳  
【摘要】:微分离微克隆技术对植物的遗传研究具有重要的应用价值。但是,由于大多数植物的染色体都很小且形态上难以识别,因而该技术在植物中的应用很少。本研究以具有典型小染色体的植物黄麻为模式,对单染色体的分离和体外扩增以及利用单染色体未克隆DNA文库和cDNA膜阵列高通量地筛选特定染色体的特异cDNA探针进行了探讨。主要结果如下: 1) 用玻璃针显微分离法成功分离到了长果种黄麻(Corchorus olitorius L)闽引一号和圆果种黄麻(Corchorus capsularis L.)高雄青皮单染色体各80条。 2) 将分离到的闽引一号和高雄青皮单染色体分别进行LA-PCR和DOP-PCR两种方法的两轮扩增,分别得到250-2000bp和100-600bp之间的DNA片段。用LA-PCR共扩增闽引一号和高雄青皮单染色体各45条;用DOP-PCR共扩增闽引一号和高雄青皮单染色体各5条,从而建立了闽引一号和高雄青皮单染色体未克隆文库各50个。Southern杂交表明,获得的扩增片段确实来自黄麻基因组。 3) 分别构建了闽引一号和高雄青皮的cDNA文库,两个文库的滴度均达到了1.8-1.9×10~6个pfu/ml。 4) 用同位素标记单染色体未克隆DNA文库,运用cDNA膜阵列杂交进行高通量探针筛选的探索。结果预示了应用cDNA膜阵列高效率筛选特定染色体特异探针的可行性。这一探索性研究将对黄麻单染色体的分类和建立高密度分子标记连锁图谱及染色体进化和比较基因组研究奠定基础。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S563.4

【参考文献】
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