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《福建农林大学》 2004年
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草菇开伞基因克隆及反义表达载体构建

罗联忠  
【摘要】:草菇子实体的发育大致经过以下六个阶段:针头期(Pinhead)、小纽扣期(Tiny button)、纽扣期(Button)、蛋形期(Egg)、伸长期(Elongation)和成熟期(Mature)。子实体在不同时期的生理特征变化显著,尤其是在蛋形期进入伸长期时呼吸强度开始急剧增强,子实体的形态也从未破膜的卵形变成开伞,失去商品价值。是什么原因使草菇子实体在短时间内产生这么大的变化?本研究通过细胞形态变化,激素水平变化以及特异基因的表达等方面进行了探索研究。主要研究及结果如下: 1.细胞伸长主导伸长期子实体菌柄快速伸长 显微观察草姑子实体菌柄细胞在不同发育时期以及菌柄不同部位在蛋形期和伸长期的细胞形态并测量了细胞大小变化,同时通过菌柄标记观察并测量了子实体菌柄的伸长区间。结果表明:在蛋形期草菇主要是通过细胞分裂使细胞数增加而使子实体长大,从伸长期开始,子实体菌柄伸长的主导因素是菌柄中上部细胞的伸长,同时菌柄顶部细胞的分裂起辅助作用。 2.内源激素水平变化与子实体生长显著相关 测量子实体菌柄在不同发育阶段的内源激素水平变化,结果显示:在蛋形期之前,无论促进生长类激素还是衰老类激素都没有明显的变化;但是在伸长期,促进生长类激素GA_(1/3)和ZRs急剧上升到顶峰,衰老类激素ABA则急剧下降;到成熟期,GA_(1/3)和ZRs的含量比伸长期时明显下降,但仍维持在较高的水平,ABA的浓度在成熟期时下降到最低水平。在不同发育时期中GA_(1/3)的浓度变化主导GA_(1/3)/ABA的比率变化,GA_(1/3)/ABA可能是主导菌柄细胞生长的重要因素,但子实体进入成熟期后的衰老过程可能有其它控制衰老的生理因子起关键作用。 3.克隆到开伞阶段特异表达基因片段 通过抑制性扣除杂交法,以蛋形期子实体菌柄的Total mRNA为驱赶子,伸长期子实体菌柄的Total mRNA为目的子,克隆子实体菌柄在伸长期特异表达的基因,结果得到一个基因片段,测序并登录GENBANK进行同源性比较,没有与此序列相同的基因。以该基因片段为模板合成引物并进行基因组DNA扩增,双引物扩增到目的片段,单引物扩增得到1~2KB左右的扩增片段。 4.正、反义基因片段表达载体的构建 酶切分离克隆质粒中的目的基因片段,同时对酶切的目的表达载体进行末端平滑及去磷酸化处理,通过平末端连接,将克隆的基因片段插入到PCB载体的多克隆位点中,转化大肠杆菌,随机挑选阳性菌落,提取质粒进行测序,证实获得分别具有正反序列的克隆载体。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S646.1

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 方明;姚方杰;陈影;王晓娥;;几种主要食用菌的遗传转化研究进展[J];菌物研究;2012年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 傅俊生;草菇遗传规律研究[D];福建农林大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 赵光辉;草菇杂交育种研究[D];福建农林大学;2011年
2 傅俊生;草菇杂交育种研究及其分子遗传标记的建立[D];福建农林大学;2007年
3 李刚;草菇分子标记辅助育种研究[D];福建农林大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 万鲁长,曹德宾,曹德强,兰传进,刘宝刚,刘红霞;北方地区麦秸复合料有效积温与草菇生物量关系研究初报[J];山东农业科学;1999年01期
2 檀根甲,承河元,毕璋友,吴秀水;几种抗菌素和激素类物质对稻白叶枯病菌生长的影响[J];安徽农业科学;1997年03期
3 张闽春,李连伍;低温季节草菇栽培关键技术[J];北京农业;2001年11期
4 齐国辉,郗荣庭;VA菌根菌对苹果组培苗内源激素含量的影响[J];河北农业大学学报;1997年04期
5 张宏,肖文华,梁后杰,房殿春,杨仕明,罗元辉;人DNA MTase反义基因转染对诱导肝癌SMMC7-721细胞凋亡的影响[J];第三军医大学学报;2002年11期
6 邹伯琼,曹裕汉;草菇单孢子选育种研究[J];广东农业科学;2001年04期
7 马鹏鹏,薛社普,韩代书;RNA干扰技术的原理与应用[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2003年02期
8 朱小石,李缠生,王峥;呼吸道病毒基因反义技术的研究进展[J];国外医学.病毒学分册;2001年01期
9 王敏;卵巢恶性肿瘤的反义基因治疗研究进展[J];国外医学.妇产科学分册;1998年05期
10 李劲,萧浪涛,蔺万煌;植物内源茉莉酸类生长物质研究进展[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2002年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 薛炳烨,束怀瑞;应用基因工程改良果实成熟特性研究进展[J];山东农业科学;2002年04期
2 于惠敏;侯丙凯;;番茄基因工程及生物反应器研究与开发进展[J];山东农业科学;2007年02期
3 赵逢涛;王宗文;王景会;申贵芳;韩宗福;李汝忠;;鲁棉研21号高产稳产生理特性研究[J];山东农业科学;2010年02期
4 汪新文;;茉莉酸参与植物逆境胁迫的研究进展[J];安徽农学通报;2008年06期
5 李倩楠;唐清华;周琪;;茉莉酸对植物生长发育的作用以及在农业生产上的应用[J];安徽农学通报;2008年12期
6 景华军;;菌根真菌及对林木的接种效应研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年21期
7 万娅琼,夏静,姚自鸣;臭氧及负氧离子技术在果蔬贮藏保鲜上的应用[J];安徽农业科学;2001年04期
8 徐增汉,王能如,何孔松,吴文喜,周慧玲;植物生长物质对烟草源库的作用[J];安徽农业科学;2002年01期
9 刘超,徐宏青,王宏;双孢蘑菇辐照保鲜研究[J];安徽农业科学;2002年06期
10 秦毓茜;;乙烯的生物合成及信号转导研究进展[J];安徽农业科学;2006年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 常尚连;张立宾;;农杆菌介导西瓜转基因提高糖度的研究[A];山东园艺学会第七次会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2011年
2 周玉欣;杨秀珍;戴思兰;;6-BA延缓切花菊‘优香'叶片衰老作用的研究[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
3 高海生;权英;;果蔬贮藏保鲜技术的现状与发展趋势[A];农业机械化与全面建设小康社会——中国农业机械学会成立40周年庆典暨2003年学术年会论文集[C];2003年
4 于振文;田奇卓;潘庆民;岳寿松;姜东;王东;;黄淮麦区冬小麦超高产栽培的理论与实践[A];2004’中国作物学会学术年会文集[C];2004年
5 张海娜;李金才;李存东;肖凯;;植物叶片衰老的生理和分子基础[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
6 程奇;吕蓓;沈桂芳;;能源微藻生产生物柴油的意义及其开发价值[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第二卷)[C];2010年
7 张秋明;郑玉生;肖浪涛;刘昆玉;谢深喜;;柑桔离体叶片氨,精氨酸与腐胺代谢关联的分析[A];中国园艺学会成立70周年纪念优秀论文选编[C];1999年
8 齐国辉;张林平;李春立;王红梅;仇丽饮;韦翠鸾;刘海军;;丛枝菌根真菌对银杏幼苗生长的影响[A];中国园艺学会干果分会成立大会暨第二届全国干果生产与科研进展学术研讨会论文集[C];2001年
9 王勇;陆旺金;张昭其;;ABA在果实采后领域的研究进展[A];中国园艺学会第五届青年学术讨论会论文集[C];2002年
10 王浩波;高秀武;郭金华;程国旺;吴李君;余增亮;;低能离子束介导南瓜DNA转化西瓜及转化后代的研究[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王传堂;生物技术和近红外技术在花生育种中的应用[D];中国海洋大学;2010年
2 姜天甲;主要食用菌采后品质劣变机理及调控技术研究[D];浙江大学;2010年
3 刘宏波;甘蓝型油菜抗病虫基因遗传转化及转基因植株抗性鉴定的研究[D];浙江大学;2010年
4 刘倩;胞内海藻糖对球孢白僵菌耐热力的贡献及其代谢相关基因的功能鉴定[D];浙江大学;2010年
5 胡芳;甜柿果实采后生理变化对1-MCP处理的响应机制及电学特性变化的研究[D];西北农林科技大学;2010年
6 乌仁陶格斯;内蒙古典型森林类型土生空团菌生态分布的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
7 宋福南;白桦木质素合成苯丙氨酸途径相关酶基因的表达和功能分析[D];东北林业大学;2009年
8 陈美元;双孢蘑菇基质降解能力退化分子机理的初步研究[D];福建农林大学;2011年
9 黄建军;ROR2在骨肉瘤组织及细胞中的表达及其对骨肉瘤细胞生物学行为影响的初步研究[D];中南大学;2010年
10 付绍红;RNA干扰技术提高甘蓝型油菜含油率研究[D];四川农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李海峰;香菇子实体发育相关基因的克隆及分析[D];华中农业大学;2010年
2 郑芳;茶树接种VA菌根生理生化特性的研究[D];华中农业大学;2010年
3 王茜;空气电离生成气对黄瓜储藏品质影响的研究[D];华中农业大学;2010年
4 张晓黎;番茄耐贮藏基因标记开发及辅助自交系选育[D];华中农业大学;2010年
5 王秋芳;高能电子束和臭氧对巨峰葡萄贮藏品质的影响[D];山东农业大学;2010年
6 杜斌;小麦芒长抑制基因B1近等基因系的鉴定及遗传分析[D];山东农业大学;2010年
7 刘媛媛;番茄农杆菌介导基因转化技术体系的优化与番茄LeJA2基因的功能研究[D];山东农业大学;2009年
8 曹刚;三种药剂对荒漠区日光温室红地球葡萄生长发育和生理特性的影响[D];甘肃农业大学;2010年
9 吴小华;不同贮藏温度下纳米SiOx涂膜对灵武长枣采后生理和贮藏品质的影响[D];甘肃农业大学;2010年
10 苗翠翠;利用人工设计小RNA抑制铜绿假单胞菌的致病因子表达[D];中国海洋大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 万鲁长,曹德宾,曹德强,兰传进,刘宝刚,刘红霞;北方地区麦秸复合料有效积温与草菇生物量关系研究初报[J];山东农业科学;1999年01期
2 温海祥,肖洪东,黄剑波,温玉辉,任吉君;草菇种内原生质体融合育种研究[J];北方园艺;2000年03期
3 张闽春,李连伍;低温季节草菇栽培关键技术[J];北京农业;2001年11期
4 谢宝贵,羿红,黄志龙,林友照,谢福泉,江玉姬;草菇杂交育种及同工酶分析[J];福建农业大学学报;2001年03期
5 邹伯琼,曹裕汉;草菇单孢子选育种研究[J];广东农业科学;2001年04期
6 吴圣进,陈丽新,陈少珍,韦仕岩,王灿琴,陈振妮;热激及几个营养因子对草菇担孢子萌发的影响[J];广西农业科学;2004年03期
7 陈文良;香菇新品种L_(934)和L_(937)的培育[J];华北农学报;1994年04期
8 巫光宏,詹福建,钱春梅,黄卓烈,周立莉,岑剑伟;不同温度处理对草菇、真姬菇蛋白酶活性变化的影响[J];华南农业大学学报;2004年02期
9 王杰;林俊芳;云慧芬;张凯;郭丽琼;;草菇原生质体制备、再生及转化研究[J];华南农业大学学报;2007年03期
10 王杰;林俊芳;郭丽琼;;影响农杆菌介导草菇遗传转化的因素研究[J];华南农业大学学报;2010年01期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 王艺红;林俊芳;赵风云;张凯;梁镇兴;郭丽琼;;多功能纤维素酶基因(mfc)遗传转化草菇的研究[A];第二届全国食用菌中青年专家学术交流会论文集[C];2008年
2 ;第九届全国食用菌学术研讨会[A];第九届全国食用菌学术研讨会摘要集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 姚芳杰;金顶侧耳基因连锁图谱与双—单交配机制解析及高温型菌株选育研究[D];吉林农业大学;2002年
2 谢宝贵;银耳遗传转化系统的建立及三个品质基因的转化[D];福建农林大学;2004年
3 郑亚凤;高多糖的姬松茸和灰树花品种及其生物活性的研究[D];福建农林大学;2008年
4 孙淑静;银耳生物反应器的基础研究[D];福建农林大学;2008年
5 傅俊生;草菇遗传规律研究[D];福建农林大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 熊盛;草菇遗传转化体系建立的研究[D];华南热带农业大学;2002年
2 刘维侠;金针茹色泽基因的分子标记技术研究[D];福建农林大学;2004年
3 朱虎;高赖氨酸蛋白基因转化银耳研究[D];福建农林大学;2004年
4 季哲;黄伞的交配及发育相关基因的研究[D];南京农业大学;2004年
5 陈剑;不同草菇菌株特性研究与分子标记辅助杂交育种[D];福建农林大学;2006年
6 卢启泉;四类平菇种质资源的分子标记分析[D];福建农林大学;2007年
7 傅俊生;草菇杂交育种研究及其分子遗传标记的建立[D];福建农林大学;2007年
8 姚太梅;平菇单孢杂交及后代筛选[D];河北农业大学;2008年
9 李刚;草菇分子标记辅助育种研究[D];福建农林大学;2008年
10 张硕;猴头菌单孢杂交及后代筛选[D];河北农业大学;2009年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 刘朋虎;邓优锦;江玉姬;谢宝贵;;草菇PGAM基因克隆、结构及其在同核、异核菌株中的表达量分析[J];福建农业学报;2012年03期
2 薛承琴;周慧敏;汪虹;鲍大鹏;陈明杰;;草菇子代单孢菌株的菌落类型与A因子分布规律研究[J];菌物学报;2013年01期
3 刘朋虎;谢宝贵;邓优锦;江玉姬;;草菇磷酸果糖激酶(PFK)基因克隆、结构及不同菌株中表达量分析[J];菌物学报;2013年02期
4 方明;姚方杰;王晓娥;陈影;;木耳emg1基因克隆与生物信息学分析[J];吉林农业大学学报;2013年04期
5 陈建中;祝子坪;吴潇;何建华;蒋玮;王金斌;唐雪明;;双亲灭活原生质体融合技术在草菇耐低温菌株选育上的应用[J];中国农业科技导报;2013年05期
6 刘靖宇;江玉姬;谢宝贵;陈炳智;廖伟;邓优锦;刘朋虎;;应用iTRAQ结合2D LC-MS/MS技术分析草菇同核和异核菌丝蛋白质组[J];食用菌学报;2012年01期
7 刘靖宇;江玉姬;谢宝贵;陈炳智;廖伟;邓优锦;;iTRAQ结合2D LC-MS/MS技术在草菇不同生长发育时期蛋白质组分析中的应用[J];微生物学通报;2012年06期
8 陈志宏;郑铃;刘新锐;谢宝贵;;草菇菌种不同保藏方法的效果比较[J];食药用菌;2012年06期
9 方明;姚方杰;王晓娥;陈影;张志伟;任洋洋;;木耳新品种‘吉黑2号’[J];园艺学报;2013年06期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 肖扬;几种新型分子标记技术在中国香菇种质资源遗传多样性研究中的应用[D];华中农业大学;2009年
2 刘朋虎;草菇同核、异核菌株间差异基因表达的研究[D];福建农林大学;2012年
3 刘靖宇;草菇不同生长发育时期的比较蛋白质组学分析[D];福建农林大学;2012年
4 孟丽;草菇形态建成中差异表达转录因子的筛选及关键基因的功能分析[D];吉林农业大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 林瑞虾;草菇~(60)Co诱变育种研究[D];福建农林大学;2011年
2 赵光辉;草菇杂交育种研究[D];福建农林大学;2011年
3 李刚;草菇分子标记辅助育种研究[D];福建农林大学;2008年
4 贵甫;草菇数字基因表达谱揭示同核体与异核体CAZymes表达差异[D];福建农林大学;2012年
5 陈炳智;草菇子实体生长素代谢相关基因的差异表达分析[D];福建农林大学;2012年
6 邹锋;草菇A因子及其多态性分析[D];福建农林大学;2012年
7 王晓霞;茯苓单孢菌株主要生物学特性的初步研究[D];华中农业大学;2012年
8 杨维丽;中国草菇主产区栽培品种种质评价及资源库的建立[D];吉林农业大学;2012年
9 陈建中;基因组重排技术在草菇耐低温菌株选育上的应用[D];上海海洋大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张宏,肖文华,梁后杰;正反义人DNA(5-胞嘧啶)甲基转移酶基因片段真核表达载体的构建[J];癌症;2001年11期
2 马爱民,贺冬梅,潘迎捷;应用原生质体技术培育双孢蘑菇杂交新菌株[J];长江蔬菜;1998年09期
3 刘振岳,邢宏燕,马云川;紫孢侧耳平菇原生质体再生无性系的变异性研究[J];河北农业大学学报;1994年01期
4 张有林,陈锦屏,王明珍,张宝善,韩军歧;葡萄贮期脱落酸(ABA)变化的研究[J];西北植物学报;2000年04期
5 张有林,陈锦屏,苏东华;葡萄、鲜枣采后贮期脱落酸(ABA)变化与呼吸非跃变性研究[J];西北植物学报;2002年05期
6 张宏,肖文华,梁后杰,房殿春,杨仕明,罗元辉;人DNA MTase反义基因转染对肝癌细胞DNA MTase基因mRNA表达的影响[J];第三军医大学学报;2002年11期
7 潘东明,陈桂信,郑国华,林慧颖,佘文琴;植物生长调节剂对王官溪蜜柚汁胞粒化的影响[J];福建农业大学学报;1998年02期
8 尹金华,高飞飞,叶自行,陈大成;乙烯对荔枝果实成熟的影响[J];果树科学;1999年04期
9 李桂芬,刘延松;葡萄贮藏生理研究进展[J];果树科学;2000年01期
10 季作梁,王钢涛;荔枝果实发育过程中细胞分裂素的变化[J];果树科学;1996年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈明杰;草菇低温应答研究[D];南京农业大学;2000年
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1 苏明声;王秋颖;曾念开;吴丽伟;;斜生褐孔菌子实体的诱导和发生条件[J];菌物学报;2008年05期
2 Philip G.Miles;刘茵华;范黎;曹晋忠;;环境、营养及化学因子对子实体形成的影响(连载)[J];中国食用菌;1987年04期
3 闫红;杜适普;张莹;闫灵玲;;草菇子实体阶段常见生理性病害及防治方法[J];中国园艺文摘;2013年05期
4 寺下;吴锦文;;酶抑制剂对担子菌子实体形成的影响[J];食用菌;1981年02期
5 Philip G.Miles;刘茵华;范黎;曹晋忠;;环境、营养及化学因子对子实体形成的影响[J];中国食用菌;1987年03期
6 吴本防;王佃强;;双孢菇常见杂菌、病、虫害及其防治措施[J];科技致富向导;2007年11期
7 丁文;;食用菌主要病虫害防治新方法[J];农村科技开发;2002年02期
8 王志军;杜树旺;王凤涛;王月娥;;白灵菇子实体常见病害及防治[J];中国食用菌;2008年05期
9 Philip G. Miles;刘茵华;范黎;曹晋忠;;环境、营养及化学因子对子实体形成的影响(连载)[J];中国食用菌;1987年05期
10 董建超;;平菇的生理性病害及其防治[J];新农村;1998年09期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 程显好;田吉腾;张秋胜;王琦;冯志彬;丁娟;;粉托鬼笔在山东烟台的分布及影响其子实体形成的因素[A];中国菌物学会2009学术年会论文摘要集[C];2009年
2 李海峰;范秀芝;边银丙;;香菇球形子实体发育相关基因的克隆及分析[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 宁远县柏家坪镇双井圩办事处 吴健;用子实体作菌种好处多[N];湖南科技报;2000年
2 张尧;种植高产双孢菇的要素和条件[N];大理日报(汉);2011年
3 苗苗;栽培双孢菇注意啥[N];山西科技报;2000年
4 齐建军;食用菌四类病害的防治[N];山西科技报;2005年
5 广东省农科院蔬菜所食用菌研究开发中心 何焕清副研究员;平菇高温反季节栽培[N];广东科技报;2003年
6 江农荐;七种蘑菇追肥液的配制使用[N];山西科技报;2004年
7 王选;蘑菇追肥液的配制与使用[N];山西科技报;2004年
8 锋飞;巧制无公害蘑菇肥[N];山西科技报;2004年
9 湖南农业大学食用菌研究所教授 夏志兰;蘑菇高产诀窍:培养料中添辅料[N];湖南科技报;2009年
10 景山;巧制无公害蘑菇肥[N];山西科技报;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 潘丹丹;长座虫草子实体成分及抗氧化活性的研究[D];安徽农业大学;2012年
2 罗联忠;草菇开伞基因克隆及反义表达载体构建[D];福建农林大学;2004年
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