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《福建农林大学》 2005年
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棉铃虫N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质研究

黄小红  
【摘要】:以棉铃虫的蛹为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、Sephadex G-200分子筛柱层析和DEAE-32离子交换柱层析纯化,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶酶(NAGase,EC3.2.1.52)制剂。纯酶的比活力为2678.79 U/mg。酶催化对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖水解的最适pH为5.63,最适温度为55℃。该酶在pH 4~8区域较稳定,而在pH8能迅速失活;酶促反应符合米氏方程,K_m为0.1629 mmol/L,V_m为10.73μmol/L/min,活化能为66.24 kJ/mol。酶分子的分子量为89.3 kD。 研究金属离子对棉铃虫NAGase活力的影响。结果表明,Na~+、K~+和Li~+等金属离子对酶活力没有任何影响。Mg~(2+)、Ca~(2+)、Co~(2+)对酶活力影响不显著,Zn~(2+)、Cu~(2+)、Cd~(2+)、Al~(3+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)对该酶有不同程度的抑制作用。研究Cu~(2+)、Al~(3+)、Zn~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)的抑制作用动力学,结果表明:这些金属离子对酶均表现为可逆抑制作用,Cu~(2+)的抑制类型为混合型,抑制常数K_1为0.23 mmol/L,K_(IS)为1.49 mmol/L。Al~(3+)为竞争性类型,抑制常数K_1为6.42mmol/L。Hg~(2+)为混合型,抑制常数K_1为28.43μmol/L,K_(IS)为2.25μmol/L mmol/L。Pb~(2+)为非竞争性抑制,抑制常数K_(IS)为0.3208mmol/L。Zn~(2+)为竞争性类型,抑制常数K_I为1.158 mmol/L。Zn~(2+)对酶的pH稳定性的影响不明显,而有Zn~(2+)存在时,在30-40℃范围内,酶是稳定的,温度高于50℃后,随着Zn~(2+)浓度的增加,酶的热失活程度可以缓解。 用金属螯合剂(EDTA)处理棉铃虫NAGase后可使酶活力完全丧失,说明该酶活力的发挥与某些的金属离子有关。 研究几种有机溶剂对棉铃虫NAGase的活力与构象的影响。结果表明:甲醇、乙醇和乙二醇对酶有先扬后抑作用,正丙醇和丙三醇对酶有失活作用。多元醇中的乙二醇对酶的效应是先扬后抑,丙三醇不同的浓度均可使酶活力下降,两者相比,丙三醇对酶的失活作用略比乙二醇的强。甲醛对酶的活性有抑制作用,是一种可逆混合型抑制作用。抑制常数K_I与K_(IS)分别为
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S433

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 石艳;菜青虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的性质研究[D];厦门大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 邓琳芬;米曲霉FS-1脂肪酶发酵优化、分离纯化与酶学特性的研究[D];福建师范大学;2011年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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6 赵祥杰;邝哲师;叶明强;罗国庆;肖更生;;一株蚕蛹壳几丁质降解菌的分离与初步鉴定[A];中南五省区蚕桑育种协作研讨会论文集[C];2009年
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10 李德发;马曦;孙鹏;;大豆抗原蛋白研究进展[A];动物营养研究进展——中国畜牧兽医学会动物营养学分会第八届全国代表大学暨第十届学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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8 单海霞;新型烷基咪唑离子液体的合成及应用[D];江南大学;2010年
9 陈义勇;桦褐孔菌多糖纯化、结构及其抗肿瘤机制研究[D];江南大学;2010年
10 张月杰;刺参岩藻多糖对神经干/前体细胞的增殖作用及其机制研究[D];山东大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王凯;草地螟生殖行为和能力及其在不同环境生理条件下的变异[D];华中农业大学;2010年
2 罗森林;云斑天牛交配行为研究及化学感受蛋白基因的克隆[D];华中农业大学;2010年
3 谢进;抗鹅膏肽的全合成及其活性测定[D];中南林业科技大学;2009年
4 张伟;分子光谱法研究蛋白质与小分子的相互作用及其分析方法研究[D];郑州大学;2010年
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7 兰任;基于并行混合粒子群算法的蛋白质结构预测[D];大连理工大学;2010年
8 廖雯娟;豆腐柴果胶的分离及其性质研究[D];安徽农业大学;2010年
9 王金彬;戴氏虫草(Cordyceps taii)的化学成分及其清除自由基活性物质的研究[D];安徽农业大学;2010年
10 张袁;温特曲霉PZ322产岩藻多糖酶的液态发酵条件研究[D];安徽农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 汤斌,张庆庆;红曲霉液体培养对产脂肪酶条件的研究[J];安徽机电学院学报(自然科学版);1997年04期
2 张大皓;谭天伟;王炳武;;响应面试验设计优化脂肪酶发酵培养基[J];北京化工大学学报(自然科学版);2006年02期
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6 梁放,吴一卉,曹海石,郭慧云,刘兰英,孙宏,陈维金,刘淑英;人纤维蛋白溶酶原的化学修饰[J];高等学校化学学报;2001年04期
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10 刘均洪,徐军伟,王繁业,吴汝林,杨丰科,安俊龙;南极假丝酵母生产脂肪酶发酵条件研究[J];青岛科技大学学报(自然科学版);2005年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 龚敏;南美白对虾N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶的活力调控及动力学研究[D];厦门大学;2006年
2 叶海梅;米曲霉FZ58β-葡萄糖苷酶固体发酵优化及酶学特性的研究[D];福建师范大学;2008年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 刘冰心;淡水鱼肌肉亮氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究[D];集美大学;2007年
2 章文;槐猪精液NAGase的酶学性质与活力调控[D];福建农林大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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4 黄贤智;许金钩;李耀群;;同步荧光法同时测定色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸[J];分析化学;1987年03期
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6 万谦,张洪渊;3种淡水育珠蚌碱性磷酸酶(ALP)比较酶学的初步研究[J];四川大学学报(自然科学版);1994年02期
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【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 张洁,蔡敬民,吴克,金胜先,潘仁瑞,樊美珍;球孢白僵菌Bb174固态发酵产几丁质酶产酶及酶学特征研究[J];应用生态学报;2004年05期
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5 杨虹琦,罗泽民;菜豆种子几丁质酶的分离纯化及性质研究[J];湖南农业大学学报;1998年03期
6 张学昆,李加纳,唐章林,谌利,陈云坪,陈洪源,郭益红;油菜几丁质酶的特点及其与抗菌核病的关系[J];西南农业大学学报;2001年03期
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9 戴富明,徐同;农杆菌介导木霉几丁质酶基因转化拟南芥及其T_1代对油菜菌核病抗性提高[J];上海交通大学学报(农业科学版);2005年01期
10 李继红,邵寒霜,郑学勤;烟草Ⅰ类几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶cDNA在大肠杆菌中的表达[J];生物工程学报;1998年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
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7 赵培静;夏枫耿;缪承杜;任文彬;黄俊生;;一株产几丁质酶芽孢杆菌分离鉴定及其活性的初步研究[A];十一五农业环境研究回顾与展望——第四届全国农业环境科学学术研讨会论文集[C];2011年
8 邱君志;陈宇熹;;虫生真菌座壳孢几丁质酶的初步研究[A];第八届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2007年
9 彭锟;林毅;黄小红;沙莉;苏争先;蔡文旋;张鸿声;;苏云金杆菌几丁质酶的研究[A];第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会论文集[C];2006年
10 方卫国;肖月华;冷波;杨星勇;张永军;裴炎;;一种新的球孢白僵菌几丁酶Bbchit1的纯化和基因克隆[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
中国重要报纸全文数据库 前9条
1 记者 林岳夫;海洋微生物几丁质酶研究取得进展[N];中国海洋报;2001年
2 本报记者 林岳夫 李文星;而今迈步从头越[N];中国海洋报;2002年
3 林岳夫;海洋生物科研结硕果[N];中国海洋报;2004年
4 记者 林岳夫;酶解法生产几丁寡糖达国际先进水平[N];中国海洋报;2009年
5 本报记者 王爱娥;“碧护”给农作物一把保护伞[N];农资导报;2009年
6 朱仲权;海状元818生物肥药兼用效果好[N];兵团日报(汉);2004年
7 本报记者 刘志伟;抗逆诱导剂 农业的新武器[N];科技日报;2001年
8 林枫;多氧清通过“AA级绿色食品生产资料”认证[N];农民日报;2002年
9 刘兴飞;壳寡糖杀菌诱导功能卓越[N];农资导报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 沙莉;苏云金芽胞杆菌几丁质酶活性研究[D];福建农林大学;2011年
2 郝之奎;Chitinolyticbacter meiyuanensis的筛选鉴定及其发酵产几丁质酶研究[D];江南大学;2011年
3 缑敬轩;几丁质及高附加值产物酶法生产关键技术研究[D];陕西科技大学;2012年
4 刘东;苏云金芽孢杆菌几丁质酶特性分析及其基因启动子序列的确定[D];南开大学;2010年
5 屈明博;亚洲玉米螟几丁质合酶基因表达与生理功能研究[D];大连理工大学;2012年
6 肖亮;地衣芽孢杆菌MY75几丁质酶特性及表达调控元件的研究[D];南开大学;2010年
7 刘晓健;飞蝗几丁质合成关键基因特性及转录调控研究[D];山西大学;2013年
8 王凯;黄曲霉生防菌的筛选鉴定及高效菌株JPP1的生防机制[D];哈尔滨工业大学;2013年
9 袁照年;甘薯抗蔓割病突变体的离体筛选及几丁质酶基因导入研究[D];福建农林大学;2001年
10 孙培莉;酸性哺乳动物几丁质酶在支气管哮喘发病机制中的作用[D];南京医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 沙莉;苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)几丁质酶基因的克隆、表达及其工程菌的构建[D];福建农林大学;2004年
2 伊亚莉;紫花苜蓿几丁质酶Class Ⅰ基因的克隆、序列分析及其表达[D];中国农业科学院;2011年
3 唐勇军;几丁质酶产生菌的筛选及初步应用的研究[D];湖南农业大学;2003年
4 占智高;家蚕表皮型几丁质合成酶基因的克隆及表达分析[D];西南大学;2010年
5 魏巍;棉铃虫几丁质酶cDNA克隆及表达研究[D];中国农业科学院;2002年
6 孙兰英;几丁质酶基因对黄瓜遗传转化的研究[D];东北农业大学;2003年
7 周樱;豚鼠气单胞菌CB101中几丁质酶基因的克隆及其异源表达的全酶蛋白和酶片段的功能研究[D];厦门大学;2002年
8 林成增;稻瘟病菌假定几丁质酶基因功能分析[D];福建农林大学;2010年
9 钟万芳;苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因及几丁质酶基因的克隆与特征分析[D];西南农业大学;2003年
10 谢宇飞;苏云金芽孢杆菌010菌株chi36基因克隆、表达和活性测定[D];福建农林大学;2010年
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