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《福建农林大学》 2005年
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基因枪介导的ScMV-CP基因遗传转化甘蔗研究

薛志平  
【摘要】:甘蔗花叶病(Sugarcane Mosaic Disease),是一种严重危害甘蔗生长的病毒性病害,是甘蔗三大病害之一。病发时,造成甘蔗大量减产。全球气温的升高和感病品种的大面积种植,给甘蔗花叶病防治工作增加了压力。目前,传统的耕作措施和化学药剂等方法,还没能有效地起到防治的作用。因此,培育抗病品种成为防治甘蔗花叶病最经济、安全和有效的根本方法。 但是,甘蔗是一种具有高度杂合性的异源多倍体或非整倍体的无性繁殖作物,其遗传背景十分复杂,而且甘蔗抗花叶病遗传是受微效多基因控制的数量性状,抗病育种群体分离十分广泛,这使得通过常规的育种手段很难将抗病与优良品质等目标性状优化聚合。随着现代生物技术的不断创新和发展,转基因技术的日趋完善,利用基因工程进行作物改良,控制作物病毒病害获得了巨大的成功。利用抗病毒基因工程手段将抗病毒基因导入甘蔗,培育甘蔗抗病毒品种技术已日臻成熟。 本研究用基因枪法,将含有甘蔗花叶病外壳蛋白基因的质粒pNUSCP分别转化了福农91-4621、福农95-1702、福农94-0403、桂糖96-211、桂糖96-44、粤糖96-86、粤糖96-794等七个感花叶病的糖蔗品种愈伤组织。优化了福农95-1702和福农94-0403愈伤组织的再生体系,建立了基于上述六个品种(福农91-4621除外)的G418筛选体系,获得了一批抗性再生植株。 主要研究结果如下: 1、对福农95-1702和福农94-0403愈伤组织的再生体系进行优化。采用正交设计方法,研究了6-BA、KT、NAA、活性炭的不同浓度及其组合对这两个甘蔗基因型愈伤组织分化的效果。试验研究结果表明,对于福农95-1702和福农94-0403的愈伤组织分化效果最佳的组合分别是:MS+1.5mg/L6-BA+2.0mg/LKT+0.2mg/LNAA+1.0g/L活性炭和MS+2.5mg/L6-BA+1.5mg/LKT+1.0gm活性炭。 2、建立了甘蔗G418筛选体系。G418对各供试甘蔗愈伤组织的抑制作用相似,愈伤组织生长、分化、生根3个阶段的抗性筛选质量浓度分别为20mg/L~35mg/L、15mg/L~35mg/L和25mg/L。 3、受基因枪轰击的愈伤组织,在含有G418的选择培养基上进行筛选,获得了8株抗性再生植株。分子检测后有3株PCR呈阳性,经Southern杂交分析验证,有1个株系的外源基因以单拷贝形式整合到甘蔗基因组中。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S566.1

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