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樱桃番茄种质资源遗传多样性及杂交种纯度鉴定RAPD分析

朱海生  
【摘要】:樱桃番茄(Lycopersicon Esculentum var.Cerasiforme Alef)为茄科番茄属的一种草本植物。起源于南美洲的秘鲁、厄瓜多尔、玻利维亚等热带国家。樱桃番茄果实酸甜可口,营养丰富,可溶性固形物高达7-8度,每100克鲜果中含水分94克左右,碳水化合物2.5-3.8克,蛋白质0.6-1.2克,维生素C20-30毫克,以及胡萝卜素、维生素B、矿物质等,可供生食、煮食或制成罐头贮藏,具有独特风味,是一种高档水果型蔬菜。樱桃番茄作为番茄属9个种中的一种,它的种群内不同个体间的遗传变异十分丰富,但是樱桃番茄的分子标记包括RAPD标记目前几乎是空白,这势必影响樱桃番茄种质资源的收集、保存、鉴定、利用和遗传育种。 本研究采用随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA)分子标记技术,首次对福建省农科院蔬菜研究中心的32个国内外樱桃番茄品种进行遗传多样性和分子鉴定研究,分析这些品种之间的亲缘关系,进行种质资源遗传多样性分析和品种鉴定,旨在为种质资源鉴定和杂交育种提供一定的理论依据。本研究开展了: 1、建立了樱桃番茄RAPD分析的技术体系:25ng模板DNA,0.4μmol.L~(-1)引物,0.15mmol.L~(-1)dNTP,1UTaqDNA聚合酶,1.5mmol.L~(-1)MgCl_2,2.5μL10×PCR缓冲液,加入灭菌的超纯水至25μL。反应程序为:95℃预变性5min后进行下列循环,94℃变性1min,38℃退火1min,72℃延伸2min,循环数45,最后72℃延伸10min。 2、从200个随机引物中筛选出27个引物,共扩增出214条DNA谱带,其中多态条带139条,多态性程度为64.95%。每个引物可扩增出2-12条多态性谱带,平均每个引物产生7.93条,谱带大小为270-2000bp。D=0.33时,聚类分析将供试材料分为3类,野生种聚成一类,果皮为黄色和少数红色品种聚成一类,全部是红色聚成一类。发现樱桃番茄品种根据其重要特征,表现出一定的聚集趋势。 3、筛选出应用于樱桃番茄种子纯度鉴定的引物和建立了杂交种子的RAPD指纹图谱。从27条引物中筛选出了用于樱桃番茄种子纯度鉴定的引物18条:4条偏母型引物、5条偏父型引物、4条互补型引物、2条特异型引物及3条缺失型引物。利用互补型引物S172鉴定樱桃番茄种子纯度发现:21供试种子中有2个其他种子


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