收藏本站
《福建农林大学》 2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

丁香假单胞菌番茄变种DC3000HrpA蛋白单链抗体的制备与分析

张新艳  
【摘要】:Hrp(hypersensitive response and pathogenicity,Hrp)基因广泛存在于植物病原细菌中,参与Hrp极毛系统的组装,不仅可运输效应蛋白至植物细胞,导致HR或抗病性,还可运输致病性和毒性蛋白或抑制子活性物质,引起植物病害。hrp基因多串联成簇且相当保守,在诱导培养基或植物体内,基因簇中的hrpA基因编码细菌表面附属物Hrp极毛的结构蛋白HrpA。Hrp极毛在植物-病原细菌互作中扮演十分重要的角色。病原细菌能否使亲和性植物发病与其是否有Hrp极毛有直接的关系。 在对hrp基因进行深入研究的基础上,我们尝试设计新的化学药剂和抗体阻止Hrp Ⅲ型分泌系统的组装或致病毒力蛋白因子的分泌运输,从而有效限制植物细菌病害的发展。本研究从特异性的以转化了丁香假单胞菌番茄变种菌株DC3000(Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000)hrpA基因的大肠杆菌(SGpQEHrpA/Ps)BL21(DE3)表达的工程蛋白HrpA/Ps为抗原制备而得的单克隆杂交瘤细胞系中提取RNA,经过RT-PCR获得抗体可变区基因,利用一柔性肽段(Linker)连接形成单链抗体(single chain variable fragment,scFv),后应用基因工程方法,将scFv与噬菌粒载体pCANTAB-5E连接,转化大肠杆菌TG_1,获得单链抗体噬菌体文库。此后,利用噬菌体展示技术对抗体库进行了5轮淘选(panning),获得了HrpA特异性的单链抗体。 以单克隆抗体为来源的单链抗体,亲和力和特异性都较好,可以为进一步进行植物抗病基因工程和植物抗体研究提供基因来源。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q789;S432.4

手机知网App
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 杨军;侯明生;;植物病原细菌hrp基因研究[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 陈功友;水稻黄单胞菌(Xanthomonas oryzae)hrp基因克隆与特性研究[D];南京农业大学;2000年
2 贾笑英;利用转基因技术培育马铃薯(Solanum tuberosum L.)高淀粉及抗病新品系[D];甘肃农业大学;2006年
3 邹丽芳;水稻黄单胞菌遗传操作体系的建立及hrp基因和avrBs3/pthA家族基因的功能研究[D];南京农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 江坚;丁香假单胞菌HrpA单克隆抗体的制备及scFv抗体库的构建[D];福建农林大学;2008年
2 张新艳;丁香假单胞菌番茄变种DC3000HrpA蛋白单链抗体的制备与分析[D];福建农林大学;2006年
3 唐昭;野油菜黄单胞菌中感受植物信号基因的鉴定[D];广西大学;2004年
4 向云;广谱抗病hrp基因诱导型植物表达载体构建[D];甘肃农业大学;2004年
5 王天文;细菌蛋白HrpA单克隆抗体的制备[D];福建农林大学;2003年
6 肖友伦;水稻黄单胞菌感知的水稻信号分子的分离及hcm1转基因烟草的研究[D];南京农业大学;2007年
7 刘彬;用比较基因组的方法分析植物病原细菌致病性相关基因[D];河北农业大学;2007年
8 王恒强;通过可诱导的信号途径提高植物的持续抗病性研究[D];石河子大学;2010年
9 姜伯乐;野油菜黄单胞菌hrp基因簇的功能鉴定和表达调控分析[D];广西大学;2004年
10 冯玉杰;转NPR1/HRP基因甜瓜的抗病性研究[D];石河子大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026