太子参细胞悬浮培养及其皂苷的提取与分析
【摘要】：本研究以太子参的幼叶为外植体，诱导培养获得太子参愈伤组织，从而建立太子参细胞悬浮系并从中提取、分离出太子参皂苷；研究不同水平或组合的激素、氮源、磷源、碳源、肌醇、细胞接种量等因素对太子参细胞生长及其皂苷合成的影响，从而建立太子参细胞生长及其皂苷合成的动态曲线，通过太子参细胞悬浮获得最高太子参皂苷产量。研究结果如下：
1．用MS／NB+BA0.2mg·L~(-1)+2，4-D1.0mg·L~(-1)+KT1.0mg·L~(-1)液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞。
2．由细胞悬浮培养获得的太子参皂苷的HPLC色谱峰值与常规种植及组培苗的相同，但纯度较好。细胞悬浮培养约30d时，培养1g干重细胞的培养液可提取总皂苷量为2.13-2.92mg，略低于大田常规种植所收获的每克干重太子参块根内的总皂苷含量(3.6-4.3mg)，与组培苗收获的太子参块根内的总皂苷含量相近。
3．太子参细胞悬浮培养培养条件优化结果表明：以5.0mmol·L~(-1)KH_2PO_4+0.5mmol·L~(-1)(NH_4)_2SO_4+2.06mmol·L~(-1)CaCl_2+200mg·L~(-1)肌醇+40g·L~(-1)蔗糖改良的NB为基本培养基，激素配方为2，4-D1.0mg·L~(-1)+NAA3.0mg·L~(-1)+KT0.5mg·L~(-1)，配合每20mL培养液接种0.03g(DW)左右的细胞液，为最适培养条件。
4．以最适培养条件进行培养，建立太子参细胞生长与皂苷合成的动态曲线结果表明：在第24d太子参细胞生长到达曲线顶峰，即可获最大的太子参细胞生物量，0.3578g(DW)·20mL~(-1)。此后，太子参细胞生长量开始下降，而太子参皂苷含量开始迅速增加，在第45d达到皂苷产量的最大值329.7147mg·20mL~(-1)。
【关键词】：太子参 细胞培养 皂苷 HPLC 【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：S567.53
【目录】：
- 中文摘要6-7
- 英文摘要7-8
- 1 前言8-18
- 1.1 药用植物细胞培养的研究概况8-12
- 1.1.1 国外药用植物细胞培养的发展概况8-9
- 1.1.2 我国的药用植物组织、细胞培养的发展概况9-11
- 1.1.3 药用植物组织培养和细胞培养问题及展望11-12
- 1.2 培养基对细胞生长和次生代谢产物生产的影响12-14
- 1.2.1 碳源对植物细胞生长和次生代谢产物生产的影响12-13
- 1.2.2 氮源对植物细胞生长和次生代谢产物生产的影响13
- 1.2.3 磷酸盐对植物细胞生长和次生代谢产物生产的影响13-14
- 1.2.4 植物生长激素对细胞生长和次生代谢产物生产的影响14
- 1.2.5 其他有机添加物14
- 1.3 高效液相色谱法(HPLC)在药物特别是植物药物检测上的应用14-16
- 1.3.1 高效液色谱法在药物检测中的应用14-15
- 1.3.2 高效液相色谱法在植物药物分析中的应用15-16
- 1.4 中草药太子参的研究概况16-18
- 1.4.1 太子参的化学成分研究16-17
- 1.4.2 太子参的栽培学研究17
- 1.4.3 太子参的生物技术及分子生物学方面的研究17-18
- 2 材料和方法18-22
- 2.1 供试材料18
- 2.1.1 太子参原种18
- 2.1.2 太子参组培苗18
- 2.2 太子参细胞悬浮系的初步建立18-19
- 2.2.1 愈伤组织的诱导与增殖18
- 2.2.2 悬浮细胞系的初步建立18-19
- 2.3 太子参细胞悬浮系的培养条件优化19-20
- 2.3.1 不同的基础培养基及酸水解酪素等对细胞生长和皂苷产量的影响19
- 2.3.2 不同的激素组合对太子参细胞生长和皂苷产量的影响19
- 2.3.3 不同的KH_2PO_4、(NH_4)_2SO_4、CaCl_2、肌醇和蔗糖浓度的不同组合对太子参细胞生长和皂苷产量的影响19-20
- 2.3.4 不同接种量对太子参细胞生长的影响20
- 2.3.5 太子参细胞悬浮系细胞生长及其皂苷合成动态曲线的建立20
- 2.4 太子参皂苷的提取、测定20-22
- 2.4.1 太子参皂苷的提取20-21
- 2.4.2 太子参总皂苷的测定21
- 2.4.3 太子参皂苷单体的高效液相色谱法(HPLC)检测21-22
- 3 结果和分析22-46
- 3.1 太子参细胞悬浮系的初步建立22-26
- 3.1.1 太子参愈伤组织增殖配方筛选22-24
- 3.1.2 不同激素组合的培养液对悬浮细胞系建立的影响24-25
- 3.1.3 悬浮细胞的生长动态25-26
- 3.2 太子参皂苷的提取、测定及比较26-32
- 3.2.1 不同材料的太子参皂苷的HPLC色谱峰图比较26-27
- 3.2.2 不同材料太子参总皂苷含量的测定分析27-28
- 3.2.3 太子参单体皂苷TZS1、TZS2的制备及其标准曲线的绘制28-31
- 3.2.4 不同前处理方法对样品的高效液相色谱分析效果的影响31-32
- 3.3 太子参细胞悬浮系的培养条件优化32-44
- 3.3.1 不同的基础培养基及酸水解酪素等对细胞生长和皂苷产量的影响32-36
- 3.3.2 不同的激素组合对太子参细胞生长和皂苷产量的影响36-39
- 3.3.3 不同的KH_2PO_4、(NH_4)_2SO_4、CaCl_2、肌醇和蔗糖浓度的不同组合对太子参细胞生长和皂苷产量的影响39-43
- 3.3.4 不同接种量对太子参细胞生长的影响43-44
- 3.4 太子参细胞悬浮系细胞生长及其皂苷合成动态曲线的建立44-46
- 4 讨论46-54
- 4.1 太子参愈伤组织的增殖效果影响分析46
- 4.1.1 激素组合对愈伤组织增殖的影响分析46
- 4.1.2 基础培养基对愈伤组织的增殖影响分析46
- 4.2 太子参悬浮细胞系的建立46-47
- 4.3 不同材料来源对太子参皂苷的“质”、“量”两方面的影响分析47
- 4.3.1 不同材料的太子参皂苷的“质”的比较分析47
- 4.3.2 不同材料的太子参总皂苷的“量”的比较分析47
- 4.4 不同检测方法对太子参皂苷含量测定的影响分析47-48
- 4.5 培养基优化对太子参细胞生长及皂苷合成的影响分析48-54
- 4.5.1 基础培养基优化对太子参细胞生长及皂苷合成的影响分析48-49
- 4.5.2 激素对太子参细胞生长和皂苷产量的影响分析49
- 4.5.3 KH_2PO_4、(NH_4)_2SO_4、CaCl_2、肌醇和蔗糖对太子参细胞生长和皂苷产量的影响分析49-51
- 4.5.4 不同接种量对太子参细胞生长的影响分析51
- 4.5.5 太子参细胞生长与皂苷合成动态曲线的分析51-54
- 参考文献54-61
- 附录Ⅰ61-62
- 附录Ⅱ 基本培养基配方62-63
- 附录Ⅲ 缩写词和英汉对照63-64
- 致谢64-65
- 在学期间发表论文65
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姚勇,李萍,王德群,李富存,彭华胜,韩邦兴;优良太子参新品系金参1号特征特性研究[J];安徽农业科学;2005年04期 |
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王宗华,唐景章,吴石金,巫靖辉,张居念,王宝华;福建柘荣太子参发生一种严重的新病害[J];植物病理学报;1997年02期 |
| 4 |
姚勇;宣州太子参及其栽培[J];中国土特产;1999年06期 |
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路富玉,徐峰,孙积泉;太子参栽培技术[J];时珍国医国药;2000年11期 |
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林光美;福建太子参的新病害及其防治[J];特种经济动植物;2000年02期 |
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;柘荣太子参入选“甲型流感”中药方[J];福建农业科技;2009年03期 |
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黄冬寿;太子参“柘参2号”的特征特性与栽培技术[J];农业科技通讯;2003年12期 |
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