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《福建农林大学》 2006年
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稻瘟菌FJ95054B菌株无毒基因的遗传分析及其BAC文库的构建

翁琴云  
【摘要】:子囊菌稻瘟病菌Magnaporthe grisea(无性Pyricularia grisea)引起的稻瘟病是世界上最重要的水稻病害之一。目前,利用抗病品种是控制该病最经济、最有效的措施,但是,由于其遗传上的多样性与复杂性,稻瘟病菌很快地便会克服寄主的抗性。而稻瘟病菌有性世代的发现及利用,为从分子水平研究该病菌的致病相关因子的遗传、变异及致病相关基因的克隆、功能研究提供了良好的试验材料。本研究利用FJ95054B与GUY11交配,建立一个随机后代群体,并进行有性后代的遗传分析,同时利用FJ95054B构建了一个稻瘟病菌的BAC文库。 本研究首先对FJ95054B与GUY11这两个亲本菌株进行毒性分析。将FJ95054B与GUY11接种在已知抗性基因的24个IRBL系列与9个日本的水稻品种上,结果表明,FJ95054B只对这33个品种中的3个有毒,而GUY11对26个品种有毒。而且FJ95054B与GUY11只在6个品种上的致病类型一致。可见,这两个菌株之间的毒性存在着较大的差异。利用已知含单一抗性基因的C101LAC Pi-1(t),C101A51 Pi-2(t),C104PKTPi-3(t),C101PKT Pi-4a,C105PPT-4L-23 Pi-4b和CO39近等基因系品种对这两个菌株进行毒性分析的结果表明,FJ95054B含Avr-Pi1,Avr-Pi2和Avr-Pi4a等无毒基因,而GUY11只含Avr-Pi4b无毒基因。 对FJ95054B与GUY11交配产生的79个有性后代进行毒性分析的结果表明,后代在C101LAC Pi-1(t),C101A51 Pi-2(t)和C101PKT Pi-4a上的无毒、有毒分离比例符合1:1,有6个后代个体发生了这三个无毒位点的重组。因此,推断FJ95054B对这三个品种的无毒性由三个不同的单一位点控制,且三个位点紧密连锁。而有性后代在C105PPT-4L-23 Pi-4b的无毒性、毒性后代分离比例符合3:1的期望值。 图位克隆是克隆无毒基因的一种主要方法,而基因组文库——尤其是BAC文库又是图位基因克隆的一个关键性技术平台。在本研究中,稻瘟菌菌株FJ95054B经提取纯化得到其基因组DNA,用限制性内切酶Hind Ⅲ部分酶切后,采用两种方法(β-琼脂糖酶消化及利用电洗脱仪洗脱)回收大片段DNA,与载体Copy Control pCC1BAC按10:1比例相互连接,转化Transfor Max EP1300 E.coli感受态细胞,通过蓝白斑筛选挑取白色克隆从而构建了FJ95054B菌株的稻
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S435.111.41

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【参考文献】
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