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有机磷农药降解菌的筛选及其降解酶特性

江玉姬  
【摘要】:1 有机磷农药降解菌的分离、鉴定 从福建三明农药厂附近的土壤分离、筛选获得一株能够高效降解甲基1605、辛硫磷、三唑磷等有机磷农药的菌株JS018,该菌在LB平板培养基上形成的菌落为粉红色,圆形,有光泽;经电镜观察,为小球状菌,直径0.5μm~0.75μm;革兰氏染色为阴性;能够在30℃~38℃温度范围内和pH7.0~9.0范围内很好的生长,最适生长温度为32℃,最适pH7.5~8.0;在含有6%NaCl以上的培养基中,不能生长。抗生素敏感性实验表明:JS018菌对安比西林、青霉素、林肯霉素有抗性;对卡那霉素、四环素、庆大霉素等敏感。碳源发酵实验表明:该菌株能发酵葡萄糖,发酵海藻糖、松三糖、乙醇;不能发酵阿拉伯糖、蔗糖、甘露糖、木糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖等;不能利用棕檬酸盐,不能液化明胶,不产生硫化氢,能还原硝酸盐,不产生吲哚,接触酶阳性,脲酶阳性。根据其形态特征,生理生化特性、16S rDNA序列分析,初步鉴定JS018为Roseomonas(玟瑰单胞菌属),Roseomonas共有6个基因型种,其中的三个已正式命名,另外三个还没有正式命名。从16S rDNA序列同源性分析,JS018与Roseomonas genomospecfes 4同源性最高,而从其它生理生化特征分析,尤其是对七叶苷水解、甘露糖氧化、葡萄糖发酵等方面与Roseomonas属的6个基因型种都有差别,JS018菌很可能是一种新种,国内还没有关于Roseomonas属的任何菌株的报道,且国内外尚未报道过该属内有降解农药的菌株。 2 JS018菌对农药的降解性能及产酶条件的优化 JS018对甲基1605、辛硫磷、三唑磷、敌敌畏等有机磷农药的降解率很高,在LB培养基中发酵36小时,降解率分别为96%、99%、98.9%、69.0%;对喹硫磷、马拉辛硫磷的降解率较高,分别为49.3%、49.4%;而对毒死婢几乎不降解,对溴氰菊酯和甲氰菊酯的降解率也非常低,几乎也不降解。 JS018产酶的最适培养基配方为:0.07%KH_2PO_4,0.03%K_2HPO_4,0.02%MgSO_4,0.1%葡萄糖,0.1%酵母粉,最适温度为37℃,pH7.0。 3 JS018菌有机磷农药降解酶的纯化及同源性分析 JS018菌有机磷农药降解酶经硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤,


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