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《福建农林大学》 2007年
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葡萄鲨烯合酶基因的克隆与原核表达

郑祥正  
【摘要】: 鲨烯合酶(squalene synthase,SQS or SS)催化两分子的法尼基焦磷酸(FPP)缩合产生鲨烯,而鲨烯的合成是类异戊二烯中央代谢途径进入三萜、甾醇等代谢支路的分支点。由于植物甾醇和三萜具有重要的保健和生理功能,因而,鲨烯合酶的研究倍受重视。 本研究采用cDNA末端快速扩增技术,首次从葡萄的叶片中分离克隆出鲨烯合酶基因,对该基因进行了序列分析。并构建了该基因的原核表达载体,成功的在BL21中表达出预期蛋白。具体结果如下: 1、基因克隆:用Trizol试剂从葡萄叶片中提取总RNA,根据不同植物SQS基因同源性较高的区域设计特异引物,利用RT-PCR技术获得957bp的葡萄SQS基因的保守序列;再以此序列为依据设计特异引物,利用RACE技术获得葡萄SQS基因的全长cDNA(1595bp),并命名为VvSQS。VvSQS包含一个完整的开放阅读框(1242bp),编码413个氨基酸残基,推导出的肽链分子量约为47.3kDa。 2、序列分析:葡萄SQS基因全长cDNA与三七(Panax notoginseng)、人参(Panax ginseng)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)SQS基因分别有82%、82%、82%的同源性;在氨基酸水平上,,葡萄SQS与三七(Panax notoginseng)、人参(Panax ginseng)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)的SQS分别有84%、83%、84%的一致性和91%、92%、91%的相似性。综上所述,推测VvSQS具有鲨烯合酶基因的功能。 3、原核表达:将鲨烯合酶基因的编码序列插入到原核表达载体pET-28a(+)中,构建了重组原核表达载体pET-SQS,转化到表达宿主菌BL21中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳结果表明其转化菌表达出47kDa左右的重组蛋白。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q78

【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
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【相似文献】
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7 本报记者 彭波;哭泣的葡萄[N];云南经济日报;2010年
8 本报记者 张华;我市“葡萄游”富有“钱”景[N];青岛日报;2010年
9 通讯员 汪进 杨成;澧县葡萄“枝翠果壮”[N];常德日报;2010年
10 贾明静;葡萄早产丰产有措施[N];科学导报;2005年
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