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《福建农林大学》 2007年
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西番莲(Passiflora edulis Sims)染色体微分离与单染色体DNA文库的构建

魏秀清  
【摘要】: 紫果西番莲(Passiflora edulis Sims)为西番莲科西番莲属的多年生常绿攀缘性藤本果树,是热带、亚热带重要果树之一。目前西番莲研究多集中于栽培引种、果实加工、进化关系等方面,对西番莲的遗传背景研究很少,基因连锁遗传图谱的研究更是缺乏,育种工作只能通过传统方式开展,效率不高。利用日益成熟的染色体显微分离技术,分离西番莲单染色体,进行PCR扩增,建立单染色体DNA文库,进而运用RAPD和AFLP技术,可以较快地从文库中筛选特异性分子标记,寻找与目的基因紧密连锁的探针,进行精细的分子作图,为西番莲的分子育种奠定理论基础。本研究以紫果西番莲的实生种子为材料,探索了西番莲的细胞学制片技术并进行了核型分析,分离了随体染色体(第4染色体)建立了单染色体DNA文库,并利用AFLP寻找染色体特异性标记。主要结果和结论如下: 1.不同浸种时间及光照对西番莲种子萌发的影响 通过对西番莲种子的浸种研究发现,适当的浸种可以提高种子的发芽率,使发芽集中。浸种3d内,发芽率与发芽势都比未浸种的高,其中以浸种1d效果最好,3d以后,发芽率和发芽势都低于未浸种处理,随着浸种时间的延长,其发芽率和发芽势逐渐下降。黑暗环境有利于西番莲种子的萌发。 2.不同预处理对西番莲根尖细胞有丝分裂中期分裂相形态的影响 不同化学药剂对西番莲根尖细胞进行处理的结果表明,采用8-羟基喹啉(0.002mol·L~(-1))处理2.5h效果最好,压片后染色体分散好,着丝点比较清晰,随体明显,便于染色体的辨认。 3.西番莲核型研究 西番莲核型的研究结果表明,染色体数目为2n=18,第1和第8对为近中部着丝粒染色体,其余7对均为中部着丝粒染色体,第4对染色体带有随体,其核型公式为2n=2x=18=14m(2sat)+4sm。 4.西番莲随体染色体DNA文库的构建 用玻璃针显微分离出西番莲带随体染色体,经LA—PCR扩增得到210~1100 bp的DNA片段。经Southern杂交表明,扩增片段与西番莲基因组DNA之间有同源性,从而证明西番莲带随体染色体DNA已经被成功扩增。将扩增产物克隆到pUCM—T载体中,约获得1.17×10~5个克隆,酶切鉴定插入片段大小为300~2000bp。 5.利用AFLP技术筛选染色体特异性标记 将LA—PCR与AFLP技术结合,对分离出的单染色体PCR产物进行AFLP分析,发现各染色体间存在明显的多态性,同时发现一对引物组合(H+L)能稳定的扩增出两条随体染色体的3条相近条带。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S667.9

【引证文献】
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【参考文献】
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