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《福建农林大学》 2007年
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苏云金芽孢杆菌LLP29菌株的分离及其对白纹伊蚊作用机理的研究

张灵玲  
【摘要】: 本研究首次从苔藓和植物叶片上分离获得了多株苏云金芽孢杆菌(Bt)野生菌株,并从白玉兰叶片上分离筛选得到对蚊虫有高效杀灭活性的LLP29 Bt菌株。为了解该新菌株的生物学特性,对其进行了形态学、基因型、蛋白等内容的研究。结果显示,该新菌株对白纹伊蚊的LC_(50)为0.33μg/mg。经PCR鉴定,该菌株的主要杀蚊基因为cyt1基因,克隆和测序该新基因,国际命名委员会将其命名为cyt1Aa6基因。成功克隆表达该基因后将其蛋白纯化,纯化的cyt1Aa6毒素蛋白对白纹伊蚊幼虫及其细胞系C6/36细胞都有高效活性。 为更好地利用该菌株及其毒性蛋白对白纹伊蚊进行生物防治,本试验以白纹伊蚊敏感品系昆虫及C6/36细胞为研究对象进行了作用机理的初步研究。免疫荧光染色和免疫组织化学实验结果表明:Cyt1Aa6毒素蛋白主要结合于C6/36细胞膜和白纹伊蚊幼虫中肠上。 据报道,Cyt1在蚊虫防治中能延缓高抗性的产生。然而本研究发现,用Cyt1Aa6蛋白连续作用C6/36细胞10代,抗性比达19.16。为了诠释该新蛋白对C6/36细胞潜在的抗性机制,本研究进行了Cyt1Aa6蛋白对敏感与抗性细胞的受体结合试验。间接免疫荧光结果显示,敏感细胞与FITC标记的抗体结合量明显大于抗性细胞。ELISA试验也得出类似结果:敏感细胞与Cyt1Aa6毒素蛋白的结合力大于抗性细胞。由此可见,受体结合能力的下降是细胞产生抗性的根本原因。Western Blot免疫杂交结果表明,抗性细胞26 kD蛋白的缺失是导致细胞产生抗性的主要原因,67 kD和52 kD蛋白数量上的减少也可能对抗性产生有所影响。 以上研究结果有利于LLP29新菌株对白纹伊蚊杀蚊机制及潜在抗性的探索,以期能更好地利用该菌株对蚊虫进行生物防治,并为有效延缓抗药性提出策略。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S476.1

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