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《福建农林大学》 2006年
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多胚柑桔合子胚的显微分离及培养

张健  
【摘要】: 多胚现象是柑桔研究及育种实践中的一个重要问题,也是柑桔杂交育种最大的障碍,多胚性柑桔品种在杂交育种时,由于珠心胚的干扰抑制,致使有性胚在早期败育死亡,导致育种过程中很难获得真正的杂种苗,使多胚性柑桔杂交育种工作受到很大的限制。因此,探索高效的合子胚分离技术,在合子胚尚未败育之前将其分离出来进行培养,克服珠心胚的干扰,挽救早期败育的合子胚,从而获得杂种苗,提高杂种率,是多胚柑桔杂种实生苗培育的有效途径,具有重要的实践意义。 本研究初步建立了多胚性柑桔早期合子胚的显微分离、离体培养及合子苗的鉴定体系,成功显微分离了柑桔早期合子胚并通过离体培养再生植株,具体结果如下: 1、多胚性柑桔早期合子胚显微分离的最适时期为授粉后50—55d。利用显微操作系统,采用自制钢针(针尖大小控制在50μm左右)代替传统的微细玻璃针,可提高多胚性柑桔早期合子胚的分离效率。 2、MS、White和MT三种基本培养基都适合柑桔早期合子胚的离体培养,柑桔早期合子胚成熟培养的最佳植物生长调节剂浓度配比为IAA1mg/L+BA20mg/L,适当提高培养基中蔗糖浓度(最适浓度为10%)、添加适量水解乳蛋白(最适浓度为400mg/L)有助于柑桔早期合子胚的生长发育。 3、固体培养与悬浮培养方式均适合柑桔早期合子胚的成熟培养,但悬浮培养方式更便于观察调控。 4、培养成熟的柑桔合子胚转入分化培养时,不需改变成熟培养时的植物生长调节剂配方,只需将蔗糖浓度降至2%,由暗培养改为光照培养即可自然再生植株。在此基础上若添加少量ZT(0.2mg/L),能促进合子胚再生植株的速度。由成熟培养转入分化培养,再生植株的最佳时期为:a、固体培养的合子胚及其次生胚发育至子叶状形态出现时,即可认为是发育成熟,可以转接至分化培养基中再生植株。b、液体培养的合子胚子叶长度大约在1—1.5cm(培养时间约8星期)时,即可认为是发育成熟,可以转接至分化培养基中再生植株。 5、经反复实验,确立了适合柑桔基因组DNA的快速提取方法和PCR反应的优化体系,筛选出6条扩增多态性较高的引物,对再生小苗进行了RAPD鉴定分析,从73株再生小苗中,鉴定出了61株合子苗,合子苗的比例达到83.6%。 综合本研究所有研究结果表明,利用显微操作系统,显微分离多胚性柑桔早期合子胚,并进一步培养再生植株,可获得高比例的合子苗,是排除多胚性柑桔珠心胚的干扰抑制,促进多胚性柑桔有性杂交育种的有效手段。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S666

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【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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