收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

辣椒WRKY转录因子cDNA的分离与功能鉴定

王育娜  
【摘要】: 辣椒(Capsicum annuum)和烟草(Nicotin tobacco)在生长过程中经常受到病害或者其它非生物环境因子的影响,病害或者环境危害常导致产量和品质的降低甚至绝收,即使频繁施用农药也难以奏效且易带来环境污染。而强化抗逆机能,培育高抗品种是解决这些作物病害问题的根本技术对策。目前两大颇具应用前景的技术对策是通过代谢途径工程或通过筛选高效诱发因子以提高植物植保素含量来提高作物抗逆水平。研究发现,转录因子对植物次生代谢起着十分重要的调控作用,相对个别或少数几个结构基因而言,转录因子的基因工程更适合于植保素代谢遗传改良的应用。本研究着眼于了解辣椒响应逆境胁迫的分子机制,从辣椒cDNA文库中分离出四个推定的WRKY转录因子,分别对其进行瞬间表达、细胞定位、荧光定量PCR分析和超表达功能分析,主要结果如下: 1.分离获得四个推定的WRKY转录因子,分别为CaWRKY,CaWRKY2,CaWRKY3,CaWRKY5,生物信息学分析他们都含有保守的WRKY结构域和锌指结构,序列比对推测可能参与不同的信号转导途径。 2.亚细胞定位发现四个推定的WRKY转录因子都能定位于细胞核,与软件预测的结果相符,说明是核定位蛋白,具有转录因子的基本特征。 3.瞬间表达验证四个推定的WRKY转录因子与W盒的结合特性,发现WRKY蛋白能特异的与W盒结合,启动GUS基因的表达。 4.荧光定量PCR分析四个WRKY转录因子的表达模式,CaWRKY受多种非生物胁迫和激素诱导,机械创伤和茉莉酸甲酯(MeJA)强烈的诱导其表达,水杨酸(SA),辣椒疫霉、盐、紫外和低温抑制其表达;CaWRKY2在盐和低温条件下变化不明显,机械创伤、JA、SA、疫霉、紫外强烈诱导其表达;CaWRKY3在疫霉和紫外下强烈诱导,SA和JA也诱导其表达,机械损伤诱导微弱表达,盐和低温变化不明显;CaWRKY5在机械损伤和JA强烈诱导其表达,SA诱导变化不明显,疫霉、紫外和低温抑制其表达,高盐处理下有升高现象,但没有很有规律的变化趋势。 5.构建了四个基因的超表达载体,用农杆菌介导法转化烟草,各获得10个T0代超表达株系。CaWRKY超表达株系的T0代植株矮化,不易感病;CaWRKY2超表达株系的T0代侧枝少,T1代植株对重金属抗性增强,表明该基因介导了植物对非生物因子胁迫的防卫反应;CaWRKY3超表达部分T1代植株对高温抗性增强,CaWRKY5的T0代和T1代对低温有明显的抗性。 上述研究初步明确了4个辣椒WRKY转录因子在非生物逆境胁迫抗性中的作用,并为进一步开展其抗逆分子机制剖析及其在基因工程中的应用研究奠定了重要基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 高国庆,储成才,刘小强,李杨瑞;植物WRKY转录因子家族研究进展[J];植物学通报;2005年01期
2 郝林,徐昕;植物转录因子WRKY家族的结构及功能[J];植物生理学通讯;2004年02期
3 李蕾,谢丙炎,戴小枫,杨宇红;WRKY转录因子及其在植物防御反应中的作用[J];分子植物育种;2005年03期
4 仇玉萍,荆邵娟,付坚,李璐,余迪求;13个水稻WRKY基因的克隆及其表达谱分析[J];科学通报;2004年18期
5 王海华,郝中娜,谢科,吴坤陆,郭泽建;水稻WRKY89中的亮氨酸拉链结构增强蛋白与W盒元件的相互作用[J];科学通报;2005年10期
6 苏琦;尚宇航;杜密英;杜进民;;植物WRKY转录因子研究进展[J];中国农学通报;2007年05期
7 田云;卢向阳;彭丽莎;方俊;;植物WRKY转录因子结构特点及其生物学功能[J];遗传;2006年12期
8 于延冲;乔孟;刘振华;向凤宁;;WRKY转录因子功能的多样化[J];生命科学;2010年04期
9 张娟;;WRKY转录因子功能研究进展[J];西北植物学报;2009年10期
10 刘戈宇;胡鸢雷;祝建波;;植物WRKY蛋白家族的结构及其功能[J];生命的化学;2006年03期
11 黄金存;叶冰莹;许玉芬;黄祖新;张华;许莉萍;陈由强;陈如凯;;转录因子WRKY和NPR1在系统获得抗性信号转导中的相互作用机制[J];生物技术通讯;2007年06期
12 常李伟;;植物WRKY转录因子的结构及功能研究进展[J];科协论坛(下半月);2011年05期
13 王海华,谢科,吴坤陆,郭泽建;稻瘟菌诱导的水稻WRKY基因OsWRKY52的分离和鉴定(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2005年10期
14 张兰;王晓萍;毕影东;张春义;范云六;王磊;;大豆转录因子GmWRKY57B的基因克隆及功能分析[J];科学通报;2008年21期
15 欧阳石文;植物WRKY转录因子[J];生命的化学;2001年03期
16 张利平;余迪求;;APETALA1突变影响WRKY基因的基础表达[J];云南植物研究;2010年04期
17 桑新华,吴忠义,黄丛林,张潞生;植物逆境抗性相关转录因子的研究进展[J];植物学通报;2004年06期
18 阚云超,郭泽建,李德葆;转录因子IosWRKY基因的原核表达及其与顺式元件的结合[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2003年01期
19 马雅琴,翁跃进,赵勇,郭宝生,许兴;植物耐盐相关基因克隆的研究进展[J];植物遗传资源学报;2004年01期
20 汪得凯,张红心,胡国成,付亚萍,斯华敏,孙宗修;一个水稻大叶角度突变体lla的遗传分析及基因克隆[J];科学通报;2005年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;A group of conserved SPTT domain containing WRKY transcription factors are potential substrates of MAP kinases in plants[A];第六届中国植物逆境生理学与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2010年
2 陈益芳;徐谦;王慧;武维华;;拟南芥WRKY转录因子在植物响应低磷胁迫中的功能分析[A];中国植物学会植物细胞生物学2010年学术年会论文摘要汇编[C];2010年
3 王晨;刘磊;姚凝聪;谭翼;马会;王夏天;何光源;杨广笑;;小麦WRKY基因的克隆、表达分析及其遗传转化[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
4 邹长松;江文波;余迪求;;拟南芥雄配子特异表达的WRKY34基因负调控成熟花粉抗冷性[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
5 王海华;郝中娜;谢科;吴坤陆;郭泽建;;水稻WRKY蛋白OsWRKY87的分析[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
6 ;The WRKY transcription factor OsWRKY78 regulates stem elongation and seed development in rice[A];现代分子植物育种与粮食安全研讨会论文集[C];2011年
7 邹长松;江文波;余迪求;;Male gametophyte-specific WRKY34 transcription factor negatively mediates cold stress tolerance of mature pollen in Arabidopsis[A];中国植物学会植物细胞生物学2010年学术年会论文摘要汇编[C];2010年
8 王彦华;侯喜林;;不结球白菜WRKY转录因子cDNA片段的克隆及分析[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
9 于延冲;向凤宁;;AtWRKY5转录因子调控拟南芥的开花时间[A];中国植物生理学会第十次会员代表大会暨全国学术年会论文摘要汇编[C];2009年
10 梁姗姗;于涌鲲;王丽芳;赵福宽;杜希华;孙清鹏;;茉莉酸诱导的番茄WRKY克隆[A];中国植物生理学会第十次会员代表大会暨全国学术年会论文摘要汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 于延冲;拟南芥转录因子WRKY71对花和分枝发育的调控机制研究[D];山东大学;2011年
2 王慧;拟南芥WRKY45转录因子参与响应低磷胁迫的实验证据[D];中国农业大学;2014年
3 赵天田;平榛WRKY转录因子的克隆与功能鉴定[D];中国林业科学研究院;2012年
4 王晨;小麦基因组中WRKY转录因子家族基因鉴定、克隆和TaWRKY10基因的功能分析[D];华中科技大学;2013年
5 江文波;拟南芥WRKY2转录调控因子的功能研究[D];中国科学院研究生院(西双版纳热带植物园);2009年
6 凌键;黄瓜WRKY基因家族及microRNA的鉴定与分析[D];中国农业科学院;2012年
7 付乾堂;拟南芥WRKY25和At2g03440编码的结瘤相关蛋白抗热功能分析[D];中国科学院研究生院(西双版纳热带植物园);2009年
8 郑井元;辣椒WRKY转录因子CaWRKY6和CaWRKY30基因的克隆、表达及功能分析[D];中南大学;2012年
9 张春秋;辣椒Me3基因介导抗根结线虫WRKY基因CaRKNIF1的分离及其功能分析[D];中国农业科学院;2010年
10 赵亮;四倍体栽培棉种高密度遗传图谱的加密及棉花红株R_1和茸毛T_1基因的精细定位[D];南京农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王丽芳;番茄WRKY基因克隆及分析[D];山东师范大学;2010年
2 贾翠玲;葡萄WRKY基因超家族的进化分析[D];辽宁师范大学;2010年
3 何红升;杨树全基因组WRKY基因的鉴定及表达分析[D];安徽农业大学;2012年
4 张娜;陆地棉三个WRKY基因的克隆及表达特性分析[D];山东农业大学;2012年
5 江腾;玉米和苜蓿全基因组WRKY基因的分析及进化研究[D];安徽农业大学;2011年
6 冯泊润;WRKY转录因子在玉米基因组中的分布规律及其中参与抗病相关基因的筛选[D];四川农业大学;2013年
7 喻门;小麦WRKY基因的克隆及其在逆境胁迫反应下的表达变化[D];华中科技大学;2009年
8 张雅涵;黄瓜根结线虫取食位点早期形成相关WRKY基因的分离与分析[D];中国农业科学院;2011年
9 喻门;小麦WRKY基因的克隆及其在逆境胁迫反应下的表达变化[D];华中科技大学;2009年
10 刘磊;小麦WRKY基因的克隆、表达分析及其遗传转化[D];华中科技大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 本报记者 操秀英;探索植物适应环境胁迫的奥秘[N];科技日报;2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978