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《福建农林大学》 2008年
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转基因生物产品PCR检测体系建立

王恒波  
【摘要】: 近年来,随着基因工程技术的迅速发展,转基因技术也日趋成熟,商品化生产的转基因生物产品也就越来越多,由此引发的转基因生物安全问题也引起了人们的广泛关注,各国政府纷纷制定相关政策法规,加强转基因生物及其产品的安全管理,截至2002年底,全球已有40多个国家和地区对转基因产品实行自愿标识或强制性标识管理制度。这些法规的实施的前提就是要建立一套稳定、准确的转基因检测技术。目前,转基因生物产品的检测技术主要以PCR技术为基础,并衍生出竞争定量PCR、实时荧光定量PCR技术等。PCR技术以其特异性强、灵敏度高、快速、准确、重复性好等优点被各国检测工作者使用。 本研究主要以转基因标准品为材料,分别采取定性PCR、竞争定量PCR、荧光定量PCR技术,对转基因产品进行检测研究,主要研究结果如下: 1.通过查阅有关文献及网站、数据库,初步明确了现有各种转基因作物的外源基因信息,收集了国内外商品化的转基因作物19种,其中8种从欧洲转基因标准品库(Fluka公司:Fluka,Buchs,Switzerland)购进,为转基因生物产品检测工作的标准化和与国际接轨奠定了基础。 2.为提高检测效率,以转基因大豆标准品为材料,检测了转入的外源基因元件,优化了PCR检测体系,建立了高通量PCR检测方法。 3.为提高检测的灵敏度,对引进的转基因玉米标准品分别检测了Bt11、TC1507、Bt176、MON863、MON810、GA21、CBH-351等7个品系的转化事件和相应的外源基因元件,其中5品系的转化事件和转基因元件检测的灵敏度均达到了0.1%检测低限,居现有检测技术标准的最高水平。 4.根据建立的转基因成分PCR检测技术体系,利用转基因抗虫水稻和棉花,以及抗花叶病、抗旱的转基因甘蔗材料,分别建立了稳定的PCR检测体系,为建立相关检测技术标准奠定了基础。 5.构建了CaMV35S非同源模板的竞争子,建立转基因大豆35S启动子定量检测体系,实现了普通PCR仪定量检测转基因生物产品成分方法,检测低限达到了1%水平,基本满足了目前转基因检测最低标识的需要。 6.以荧光了染料SYBRGreenⅠ代替昂贵的Taqman探针,建立了转基因抗除草剂大豆和TC1507转基因抗虫玉米的荧光PCR的定量检测体系,利用转基因定量标准品建立的线性回归方程,通过已知含量的标准品作为待测样品进行验证,结果完全正确,且两体系的检测灵敏度均达到0.04%,已完全满足国际上对转基因定量检测的需要。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:Q785

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