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薄荚相思和流苏相思离体培养与人工种子制作

李小媛  
【摘要】: 本研究以薄荚相思(Acacia leptocawa)组培苗为材料,以流苏相思(A.fimbriata)未成熟种子、成熟种子为外植体,进行2种相思树的离体培养与人工种子制作研究。主要研究了如下内容:①薄荚相思高效离体再生体系的建立;②薄荚相思愈伤组织诱导与再生;③流苏相思高效离体再生体系的建立;④薄荚相思和流苏相思人工种子的制作;⑤薄荚相思愈伤组织再生试管苗,人工种子再生试管苗RAPD检测等。主要研究结果如下: 1.薄荚相思高效离体再生体系的建立。以薄荚相思无菌试管苗为材料,对薄荚相思增殖、生根壮苗与移栽方面进行研究,结果表明:薄荚相思在MS+0.3 mg.L~(-1)BA+0.15 mg·L~(-1)NAA的培养基上增殖效果最好,增殖系数达到3.75,且玻璃化率也控制在最低水平(18.75%)。薄荚相思生根壮苗适宜的培养基为1/2MS+0.3 mg·L~(-1)NAA+0.5 g·L~(-1)活性炭+100g·L~(-1)椰乳,生根率达到97.56%,苗长势较好,苗高为4.68。沙子:蛭石:泥炭土(2∶1∶1)的基质最适宜薄荚相思移栽,成活率达到93.33%。 2.薄荚相思愈伤组织的诱导与再生。以薄荚相思组培苗的幼嫩茎段为材料,研究愈伤组织的诱导与再生,结果表明:MS+0.1~0.15 mg·L~(-1)NAA+1.0~2.0 mg·L~(-1)BA的培养基较利于薄荚相思愈伤组织的诱导,出愈率都达到100%,且愈伤组织质量较好。愈伤组织在MS+0.1 mg·L~(-1)NAA+1.0 mg·L~(-1)BA的培养基上再生率达到50%,且再生试管苗长势较好。 3.预处理对流苏相思未成熟和成熟种子萌发的影响。以流苏相思未成熟和成熟种子为材料,对流苏相思种子无菌萌发进行研究,结果表明:在远胚端种脊处对未成熟进行切口处理,种子的萌发率可达100%。单独使用浓硫酸处理流苏相思成熟种子15min,种子的萌发率可达100%。 4.流苏相思高效离体再生体系的建立。以流苏相思种子离体萌发的试管苗为材料,对流苏相思增殖、生根以及移栽方面进行研究,结果表明:MS+0.1mg·L~(-1)NAA+0.3 mg·L~(-1)IBA+0.3 mg·L~(-1)BA+30g·L~(-1)的白糖+6g·L~(-1)的琼脂较利于薄荚相思增殖培养,增值系数为3.22。单独使用0.3 mg·L~(-1)的IBA有利于流苏相思生根培养,生根率达到了94.17%。沙子:蛭石:泥炭土(2∶1∶1)的基质最适宜流苏相思移栽,成活率达到90.48%。 5.薄荚相思与流苏相思人工种子的制作。以薄荚相思和流苏相思微芽为繁殖体,对两种相思非体胚人工种子进行研究,结果表明:采用海藻酸钙法包埋薄荚相思微芽时,2.0%海藻酸钠交换20 min最好,萌发率高到85.93%,转株率为79.69%;对流苏相思来说,3.0%的海藻酸钠交换15min则更有利于人工种子的萌发,萌发率为85.71%。中空海藻酸钙包埋法在两种相思人工种子萌发方面都不如海藻酸钙包埋法。在薄荚相思人工胚乳中添加0.05mg·L~(-1)NAA、0.1mg·L~(-1)BA使得人工种子的萌发率提高了2.89%;通过对人工种子在自然条件下失水与复水的研究确立了双层海藻酸钙包埋法、涂抹丙三醇、添加聚乙烯吡咯啉酮为较好的保水包埋方法;薄荚相思人工种子适宜的贮藏温度为4℃;薄荚相思和流苏相思适宜贮藏的包埋方法为双层海藻酸钠法(4℃下贮藏60 d后的萌发率分别为39.58%、30.0%);薄荚相思有菌萌发适宜的包埋方法为MS+0.1%聚乙烯吡咯啉酮+0.05%ALCl_3+0.05%MgCl_2+0.05%COCl_2+0.2%的多菌灵+003%的苯甲酸钠的处理,适宜的播种基质为沙子:蛭石:泥炭土(2∶1∶1),60 d后成苗率达到了25.56%。 6.薄荚相思愈伤再生苗、人工种子再生植株的RAPD检测。对同一个外植体来源的薄荚相思组培苗、愈伤组织再生试管苗、人工种子再生植株进行RAPD分析。结果表明:薄荚相思愈伤组织再生苗与组培苗之间的RAPD图谱存在着遗传差异,说明愈伤组织再生途径在遗传上比较不稳定;人工种子再生植株与组培苗之间的RAPD图谱不存在遗传差异,说明人工种子具有较高的遗传稳定性。 总之,本研究建立了薄荚相思高效离体再生体系;首次采用薄荚相思无菌苗茎段诱导愈伤并获得再生植株;摸索出了流苏相思未成熟和成熟种子高频率萌发技术;建立了2种相思树人工种子技术体系;采用RAPD技术分析了薄荚相思愈伤再生试管苗和人工种子再生试管苗的遗传稳定性,对相思树离体快繁和人工种子应用具有重要意义。


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