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《福建农林大学》 2008年
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扁座壳孢菌蛋白酶的纯化及性质研究

蔡金华  
【摘要】: 座壳孢是一种重要的的虫生真菌,在其侵染害虫过程中产生的蛋白酶是重要毒力因子。基于形态特征WYSD-16被鉴定为扁座壳孢,以WYSD-16为试验材料,先通过单因素的粗筛和正交实验设计优化的方法,获得对座壳孢菌产酶条件优化的培养基。采用单因素筛选法研究碳源、氮源以及维生素对产酶量的影响,结果表明麦芽糖、蛋白胨、Mg~(2+)、V_(B6)分别为最适合该菌产酶的碳源、氮源、金属离子和维生素。通过对碳源、氮源、维生素等其他因素的正交优化得出该菌最佳产酶培养基:40g/L的麦芽糖,20g/L的蛋白胨,4×10~(-4)mol/L Mg~(2+),400mg/L的V_(B6),pH 6.0;最佳产酶条件为:接菌量8ml,装液量150ml/250ml,菌龄5d,培养时间10d。座壳孢菌利用优化后的产酶培养基培养10d后,蛋白酶活达到73.18 U/mL。采用硫酸铵沉淀、DEAE-52离子交换柱层析、Sephadex G-100柱层析等步骤获得了凝胶电泳均一的蛋白酶,经SDS-PAGE电泳验证表明酶蛋白的分子量约为66 kDa。该酶水解酪蛋白的最适温度为50℃,最适pH值为8.0;Na~+、乙醇对酶活都有较大的促进作用。
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