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《福建农林大学》 2010年
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克氏原螯虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的性质及活力调控

陈欣颖  
【摘要】: N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶在昆虫和甲壳动物角质层的转化和转移及营养消化的生理过程中发挥了重要作用。本研究采用硫酸铵分级沉淀从克氏原螯虾内脏分离出粗酶制剂后再经前后2次DEAE-32离子交换柱层析和SephadexG-100分子筛柱层析获得比活力为6540.24 U·mg-1的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶纯酶制剂。测得该酶分子的总分子量为118.66 kDa,等电点为5.15 ,每个酶分子中含有约400余个氨基酸残基;以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖(pNP-β-D-GlcNAc)为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学,结果表明,酶的最适温度为40℃,最适pH为5.5。该酶在50℃以下处理30 min,酶活力稳定,高于55℃,酶稳定性较差, 75℃酶完全失活;在pH 3.6~5.9范围内较稳定,而在pH6.2和pH3.6下失活加快;酶催化底物反应的活化能为114.89 kJ·mol-1。以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖(pNP-β-D-GlcNAc)和p-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷(pNP-β-D-GaNAc)为底物,研究酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得以pNP-β-D-GlcNAc为底物时最大反应速度Vm为10.87μmol·L-1min-1,米氏常数Km为0.46 mmol·L-1;以pNP-β-D-GaNAc为底物时最大反应速度Vm为39.40μmol·L-1min-1,米氏常数Km为1.04 mmol·L-1。 金属离子对克氏原螯虾NAGase的效应试验表明:在特定浓度范围内, Li+ ,K+对酶活力几乎没有影响; Na+、Ba2+、Ca2+、Co2+则对酶有不同程度的激活作用;Mn2+、Mg2+、Pb2+、Ag+对酶有先扬后抑的作用;Zn2+、Hg2+、Cu2+、Al3+等重金属离子对酶都有不同程度的抑制作用。在一定浓度范围内,金属离子对克氏原螯虾NAGase的抑制作用强度从大到小依次为:Hg+ Cu2+ Al3+ Zn2+ Ag+ Pb2+ Mn2+ Mg2+。Mn2+、Ag+、Zn2+、Al3+、Hg+对克氏原螯虾NAGase的抑制均表现为可逆反竞争性机制,其抑制常数KI分别为0.41 mmol·L-1、1.08 mmol·L-1、1.22 mmol·L-1、0.87 mmol·L-1、0.069 mmol·L-1。Mg2+和Pb2+对克氏原螯虾NAGase的抑制表现分别为竞争性和非竞争性,其抑制常数KI分别为1.59 mmol·L-1和0.41 mmol·L-1。 氨基酸对克氏原螯虾NAGase的效应试验表明:在特定浓度范围内,非极性氨基酸L-Ala、L-Phe、L-Met、L-Pro,极性氨基酸L-Gly、L-Thr、L-Ser、L-Gln对克氏原螯虾NAGase活力没有显著影响,碱性氨基酸L-Arg、L-His、L-Lys对克氏原螯虾NAGase有不同程度的抑制作用。L-Arg、L-His、L-Lys对克氏原螯虾NAGase的IC50为45mmol·L-1、130mmol·L-1、110mmol·L-1。碱性氨基酸L-Arg、L-His、L-Lys对克氏原螯虾NAGase的抑制均表现为可逆非竞争性,其KI分别为10.76 mmol·L-1、226.12 mmol·L-1、157.70 mmol·L-1。 研究不同生长阶段克氏原螯虾各器官NAGase活力变化。结果表明:克氏原螯虾肝胰腺NAGsase活力随着年龄的增大逐期递减。酶活力I期(2~3月龄)与II期(5~6月龄)比较降低趋势差异显著,III期(9~10月龄)和II期比较有降低趋势,但差异不明显;克氏原螯虾性腺和壳膜NAGase活力变化规律一致,都是逐期递减,但I期和II期递减趋势不明显,到了III期后有了明显的下降。此外,比较同一生长期克氏原螯虾各器官NAGsase活力大小顺序为:肝胰腺性腺壳膜。 比较研究不同生长阶段克氏原螯虾肝胰腺、性腺及甲壳膜三个器官NAGase的理化性质,发现克氏原螯虾肝胰腺NAGase在I、II、III期的最适温度都是35℃;性腺NAGase在I、II期最适温度为35℃,III期为40℃;甲壳膜NAGase在I期最适温度为40℃,II、III期均为35℃。克氏原螯虾肝胰腺NAGase在I、III期的最适pH都是5.5,II期为5.2;性腺NAGase在I期最适pH为5.5,II、III期为5.2;甲壳膜NAGase在I、II期的最适pH均为4.5,在III期为5.5。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S917.4

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王长康;艾启青;黄小红;刘建昌;;山麻鸭睾丸和肝脏中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离提取及其性质的比较[J];福建农林大学学报(自然科学版);2009年01期
2 金艳冬;黄小红;王长康;李文迹;胡小寰;;河田鸡与艾维茵肉鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的特性比较[J];福建农林大学学报(自然科学版);2009年03期
3 杨革,陈洪章,李佐虎;绿僵菌几丁质酶的分离纯化及性质[J];化工学报;2005年04期
4 张愔,王诗瑾,孙改河;精液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的测定及其临床应用[J];湖南医学;1997年S1期
5 谢晓兰;王悦;陈清西;;氨基酸对凡纳滨对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响[J];海洋科学;2006年03期
6 潘小芳;谢晓兰;徐海金;赖志青;;有机溶剂对黄粉虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响[J];宁德师专学报(自然科学版);2006年04期
7 张九斌,苏晨辉;N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定及其临床意义[J];齐鲁医学检验;2004年02期
8 程明哲,苏拔贤,宋英良,叶伟勇;虾头几丁质酶的研究[J];热带海洋;1996年02期
9 李友宾;罗氏沼虾肝胰腺几丁质酶的亲和—消化纯化方法初探[J];湛江海洋大学学报;2001年02期
10 曾艳,赵南明,刘进元;几丁质酶与植物防卫反应[J];生物工程进展;1997年04期
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1 张继平;锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的性质及活力调控的研究[D];厦门大学;2006年
【共引文献】
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1 游银伟,汪天虹,岳寿松;海洋青霉(Penicilliumsp.)FS010441的形态学观察和产纤维素酶性质初步研究[J];山东农业科学;2005年01期
2 李瑞国;朱秀敏;杨慧;;不同萌发期绿豆芽蛋白质含量的测定及营养价值分析[J];山东农业科学;2011年01期
3 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
4 孔小卫,李坤,江洪波;二甲亚砜对水稻浸种及苗期的后续效应研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2002年03期
5 刘晓颖,丁毅;鸡脑P物质的制取及分析[J];安徽大学学报(自然科学版);2003年01期
6 朱华庆,陈飞,谢惠安,张萍;热击对水稻(O.sativaL.)叶绿素a,b及POR同功酶的效应[J];安徽大学学报(自然科学版);1998年04期
7 叶生梅;多菌联合固态发酵生产酒糟菌体蛋白饲料的实验研究[J];安徽机电学院学报;2001年04期
8 孔小卫;二甲亚砜(DMSO)对大豆萌发及幼苗期生理生化指标的影响[J];安徽机电学院学报;2002年04期
9 叶生梅,王岚岚,欧阳明;一株纤维素酶产生菌的固态发酵初步研究[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2003年01期
10 刘辉;张庆庆;危勤涛;舒伟刚;;红曲霉发酵米酒工艺条件的研究[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2009年01期
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1 周亚军;康建波;刘妍菊;苏丹;马龙彪;;混合肉肌原纤维蛋白特性研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
2 龚加顺;胡小静;彭春秀;周红杰;;普洱茶及其原料多糖分子组成及光谱学特性研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第二卷)[C];2010年
3 李强;陈明;夏蕊蕊;张玉臻;;生物絮凝剂产生菌M-503的分离鉴定及絮凝特性研究[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
4 付加雷;宋长征;张更林;;壳聚糖/海藻酸钠微囊对干扰素-tau的控释作用[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
5 任慧霞;赵雪;聂晓燕;;健脾止遗片有效成分对家兔膀胱明胶酶的影响[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
6 邹莹;;硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的提取[A];第十二届山东省药剂学术会议论文集[C];2006年
7 张娟;赵利;魏丽;刘建涛;曾志将;;贮藏温度和时间对蜂王浆水溶性蛋白质的影响[A];中国养蜂学会蜜蜂饲养管理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2007年
8 任慧霞;赵雪;聂晓燕;;健脾止遗片有效成分对家兔膀胱明胶酶作用的研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
9 张文娟;李聪;王步云;;几丁质酶与苜蓿抗病性研究[A];中国草学会牧草育种委员会第七届代表大会论文集[C];2009年
10 ;Inhibitory Kinetics of Betaine Hydrochloride on β-N-Acetyl-D-glucosaminidase from Prawn(Litopenaeus vannamei)[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
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1 徐军;富苯丙氨酸碱性短肽的发现及其对蛋白质等电点和免疫交叉反应的影响[D];华南理工大学;2010年
2 肖亮;地衣芽孢杆菌MY75几丁质酶特性及表达调控元件的研究[D];南开大学;2010年
3 陈义勇;桦褐孔菌多糖纯化、结构及其抗肿瘤机制研究[D];江南大学;2010年
4 田壮;食品中甾体激素残留免疫分析技术与方法研究[D];江南大学;2010年
5 邵凌健;槐糖脂补料发酵及抗真菌、抗肿瘤活性的研究[D];山东大学;2010年
6 迟雷;基于过程控制优化的重组大肠杆菌高密度发酵研究[D];西北大学;2011年
7 于莹;利用羊草EST文库克隆耐盐碱相关基因[D];吉林大学;2011年
8 孙红男;苹果渣中多酚类物质的高压脉冲电场处理及其生物活性研究[D];北京林业大学;2011年
9 冯敏毅;壬基酚对雄性花背蟾蜍抱对、精子及早期发育的影响[D];兰州大学;2011年
10 华杰;固定化酶膜反应器藕合错流萃取色谱制备5’-核苷酸[D];中南大学;2011年
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1 周艳华;可溶性鸡蛋壳膜蛋白与多肽的制备及其抗氧化活性的研究[D];华中农业大学;2010年
2 冷一非;嗜热链球菌抗噬菌体菌株的选育、培养及冻干发酵剂的研究[D];华中农业大学;2010年
3 申君;桃蚜的抗药性监测、杀虫剂的配方筛选及其增效生化机理的研究[D];华中农业大学;2010年
4 杜学敏;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质[D];河北大学;2007年
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6 洪伟;酪蛋白中血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的研究[D];安徽工程大学;2010年
7 王美花;里氏木霉swollenin在米曲霉中的表达和纯化[D];浙江理工大学;2010年
8 赵丹丹;磷胁迫下油菜幼苗叶片的蛋白质组学初步研究[D];郑州大学;2010年
9 杜新永;生姜蛋白酶分离纯化及品种间差异性比较[D];山东农业大学;2010年
10 张袁;温特曲霉PZ322产岩藻多糖酶的液态发酵条件研究[D];安徽农业大学;2010年
【二级参考文献】
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1 上官步敏,李少菁;锯缘青蟹精子超微结构的研究[J];动物学报;1994年01期
2 纪成林;虾蟹蜕壳及其在养殖上的意义[J];动物学杂志;1980年02期
3 宋霞,周开亚;甲壳类的眼柄神经激素[J];动物学杂志;2000年04期
4 徐海圣,舒妙安,邵庆均,王美珍;锯缘青蟹常见病害及其防治技术[J];水产科学;2000年05期
5 黄金勇,吕晓民,魏国庆,匡少华,曹琛;锯缘青蟹人工育苗规模化试验[J];水产科学;2004年11期
6 于嘉屏,许绍辉,张国治;人肝β—N—乙酰氨基已糖苷酶同工酶的分离纯化及抗体制备[J];第二军医大学学报;1991年01期
7 梁斌;河田鸡生产性能改良[J];福建畜牧兽医;1999年04期
8 黄小红;陈宏惠;金艳冬;薛国聪;;亚硫酸钠、过氧化氢和尿素对河蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响[J];福建农林大学学报(自然科学版);2008年01期
9 王长康;艾启青;黄小红;刘建昌;;山麻鸭睾丸和肝脏中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离提取及其性质的比较[J];福建农林大学学报(自然科学版);2009年01期
10 檀东飞,吴国欣,林跃鑫,邱文仁;锯缘青蟹营养成分分析[J];福建师范大学学报(自然科学版);2000年04期
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1 邹国祥,谭金山,侯颖一, 叶孝经, 王文兴;对虾肝胰腺肌上皮细胞的杆状病毒[J];电子显微学报;1994年05期
2 吴友吕,王方国,陈全震;对虾暴发性流行病及其预防研究[J];东海海洋;1995年02期
3 陆宏达;中国对虾肝胰腺细小病毒病的发生、发展和组织病理[J];水产学报;1997年S1期
4 吴嘉敏,姜新耀;中华绒螯蟹血淋巴和肝胰腺的总蛋白含量与性早熟的关系[J];水产学报;2000年04期
5 高玮,黄灿华,兰萍章,张立人;斑节对虾肝胰腺和血淋巴组织细胞的体外培养[J];中山大学学报(自然科学版);2000年S1期
6 成永旭,王武;虾蟹类脂类营养与中华绒螯蟹性早熟[J];科学养鱼;2000年06期
7 葛清秀,王志坚,张昊星;长江铜鱼和圆口铜鱼肝胰腺的比较研究[J];泉州师范学院学报;2001年06期
8 王宏伟,王安利,王维娜,刘瑞兰;金属离子对培养日本对虾肝胰腺细胞的影响[J];动物学杂志;2003年05期
9 陈再忠,王武,成永旭;性早熟中华绒螯蟹肝胰腺与性腺的酸性和碱性磷酸酶活性[J];水产学报;2005年05期
10 孔祥会,王桂忠,李少菁,艾春香;低温驯化下锯缘青蟹肝胰腺的抗氧化效应及ATPase活性变化[J];中国水产科学;2005年06期
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1 陈立侨;江洪波;周忠良;艾春香;;中华绒螯蟹幼体肝胰腺超微结构的研究[A];第七届全国海洋湖沼青年学者学术研讨会论文摘要集[C];2000年
2 陈立侨;江洪波;周忠良;艾春香;;中华绒螯蟹幼体肝胰腺超微结构的研究[A];中国海洋与湖沼学会甲壳动物学分会、中国动物学会、中国海洋与湖沼学会生态学分会2000年学术研讨会论文摘要集[C];2000年
3 李娜;赵云龙;;水环境中的铜对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)肝胰腺细胞超微结构的影响[A];中国动物学会甲壳动物学分会、中国海洋与湖沼学会甲壳动物学分会2004年甲壳动物学分会会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2004年
4 王茜;王兰;王定星;;铜对长江华溪蟹肝胰腺细胞超微结构的影响[A];中国动物学会甲壳动物学分会、中国海洋与湖沼学会甲壳动物学分会2004年甲壳动物学分会会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2004年
5 李嘉尧;赵云龙;;红螯螯虾卵黄发生期间肝胰腺的显微与超微结构研究[A];中国海洋湖沼学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
6 赵卫红;齐志涛;王资生;黄金田;陈立侨;;日本沼虾肝胰腺在卵巢发育过程中的作用机制研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
7 张小能;杨先乐;宋增福;胡鲲;;恩诺沙星在南美白对虾体内的药代动力学[A];2009年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2009年
8 卢建平;杨万喜;姜乃澄;;铅对日本沼虾肝胰腺细胞超微结构的影响[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
9 李贵生;何建国;江静波;;斑节对虾杆状病毒(MBV)与肝胰腺细小样病毒(HPV)在斑节对虾肝胰腺各种类型细胞中的分布[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
10 蔡生力;杨丛海;赵维信;李德尚;;中国对虾不同发育阶段肝胰腺、卵巢及血淋巴中孕酮和雌二醇含量的变化[A];第二届全国海珍品养殖研讨会论文集[C];2000年
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1 邸琳 焦欣 梁丽;冬虫夏草的药理研究[N];中国医药报;2000年
2 伊欣;赤潮毒素很害人[N];中国环境报;2004年
3 陆家平;避免虾病关键还是防[N];中国海洋报;2000年
4 辽宁省海洋水产研究所 韩家波 谭克非 王丽梅;养殖贝类大规模死亡原因及防治策略[N];中国海洋报;2000年
5 广东省水产技术推广总站 陈文 彭华林;对虾的病害防治[N];中国海洋报;2001年
6 北京康农生物技术有限公司 谢碧文 北京佳纬生物技术有限公司 黎春晖;南美白对虾主要病害及防治[N];中国海洋报;2002年
7 北京佳纬生物技术有限公司 黎春晖 北京康农生物技术有限公司 谢碧文;南美白对虾主要病害及防治[N];中国海洋报;2002年
8 辛结;赤潮毒素是人类的“健康杀手”[N];中国海洋报;2004年
9 河北远征药业股份有限公司 段晓燕;斑节对虾杆状病毒病[N];中国畜牧水产报;2001年
10 黄志斌;对虾黄头病[N];江苏农业科技报;2005年
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1 夏西超;KK-42对凡纳滨对虾生长发育相关基因时空表达的影响[D];河南师范大学;2011年
2 李冬霞;商品脂肪酶降解壳聚糖机理研究[D];江南大学;2008年
3 蒋惠;中华绒螯蟹的基因表达谱及生殖相关基因的克隆、表达模式研究[D];华东师范大学;2011年
4 王芸;pH、氨氮胁迫对中国对虾细胞凋亡和抗氧化系统影响机理的研究[D];上海海洋大学;2011年
5 李康;阿特拉津和毒死蜱对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的毒性效应研究[D];华东师范大学;2005年
6 李伟微;基于中华绒螯蟹EST序列的深度发掘—免疫和营养相关基因的克隆与表达研究[D];华东师范大学;2011年
7 雷雯雯;镉对长江化溪蟹心脏组织器官的毒性作用及机制研究[D];山西大学;2012年
8 江洪波;中华绒螯蟹蛋白质营养生理研究[D];华东师范大学;2003年
9 焦传珍;编码中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)和凡钠对虾(Litopenaeus vannamei)一种HSP70的cDNA研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2003年
10 蔡生力;对虾大颚腺的结构和生理功能及其卵巢发育的内分泌调控[D];青岛海洋大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈欣颖;克氏原螯虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的性质及活力调控[D];福建农林大学;2010年
2 宋福行;胶州湾海水中胞外酶活性的动态变化及其调控因素的初步研究[D];中国科学院海洋研究所;2001年
3 章文;槐猪精液NAGase的酶学性质与活力调控[D];福建农林大学;2012年
4 容烁;飞蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及功能研究[D];山西大学;2012年
5 王震;温补脾肾法对慢性肾盂肾炎的临床观察及对尿N乙酰B-D氨基葡萄糖苷酶的影响[D];黑龙江中医药大学;2011年
6 王宏伟;日本对虾肝胰腺及血细胞的培养[D];河北大学;2001年
7 徐秀芬;N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶试剂盒制备及其临床应用研究[D];浙江大学;2011年
8 周妍英;镉对华溪蟹的损伤与低分子量壳聚糖的防护作用[D];山西大学;2011年
9 张辉;日本沼虾肝胰腺碱性磷酸酶的纯化及特性研究[D];河北大学;2000年
10 袁军法;对虾病毒复合检测技术的建立[D];华中农业大学;2004年
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